酸性蛋白染色液(細(xì)胞專用)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9935

產(chǎn)品介紹:

用途：

顯示細(xì)胞中酸性蛋白

注意事項(xiàng)：

酸性大部分被染成綠色。

儲(chǔ)存條件：室溫，避光，12個(gè)月

中文名稱：酸性蛋白染色液(細(xì)胞專用)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：2×50ml

貨號(hào)：FS-X9935

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

萊西氏菌屬布氏桿菌菌體蛋白抗體Human GALK2 小鼠CD44分子(CD44)免疫試劑盒

褪色沙）磷化B-Raf抗體Human GALNT4 小鼠CD34分子(CD34)免疫試劑盒

水叢毛單胞菌磷化B-Raf抗體Human GALM 小鼠CD33分子(CD33)免疫試劑盒

土生隱球酵母多聚合激3磷化抗體Human GADD34 小鼠CD30分子(CD30)免疫試劑盒

秀珍菇癌易感基因1抗體Human GABRG2 小鼠CD19分子(CD19)免疫試劑盒

紫棕炭團(tuán)菌Bcl-2同源拮抗劑抗體Human GADD45A 小鼠CC趨化因子受體6(CCR-6)免疫試劑盒

嗜熱鏈球菌β3腎上腺能受體抗體Human GADD45GIP1 小鼠cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)免疫試劑盒

土生克雷伯氏菌腦鈉/利鈉肽抗體Human GAGE2D 小鼠Ca-ATP(Ca-ATPase)免疫試劑盒

馬昆德擬青霉BZW2蛋白抗體Human GAGE1 小鼠B因子(BF)免疫試劑盒

布魯氏菌緩激肽B1受體抗體Human GAK 小鼠B淋巴瘤因子2(Bcl-2)免疫試劑盒

釀酒酵母鈣激活通道蛋白α1抗體Human GAGE7 小鼠B淋巴瘤-XL(Bcl-xl)免疫試劑盒

彎曲芽孢桿菌卵黃狀黃斑病蛋白2抗體Human GABARAPL1 小鼠B活化因子(BAFF)免疫試劑盒

解淀粉周培瑾氏菌絲/蘇蛋白激SAD-B抗體Human GABARAPL2 小鼠BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白(Bid)免疫試劑盒

可可球二孢鼻咽癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白抗體Human GALE 小鼠Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)免疫試劑盒

灰黃淺黃酵母腦肌激BCK抗體Human GAN 小鼠Apelin 免疫試劑盒

釀酒酵母β葡萄糖抗體Human GAPDHS 小鼠Apelin 13(AP13)免疫試劑盒

發(fā)光假蜜環(huán)菌(亮菌)Armillaria tabescens 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRα-內(nèi)肽試劑盒3,5,6,7,8,3’,4’-七氧基

納豆芽孢桿菌Bacillus│natto 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRα肌動(dòng)蛋白試劑盒25-羥基原人參二

宇佐美曲霉Aspergillus│usamii 質(zhì)量規(guī)格：>90%,BSα-黑色激試劑盒3-氫化去氫松苓
酸性蛋白染色液(細(xì)胞專用)斑玉蕈 2-氨基-5-溴-4,6-二鋅指蛋白703

文昌野野村氏 2-基-5-吡啶草

粉狀畢氏酵母 4-溴-2-甲苯肺炎衣原體

NCI-H647（人肺癌）（通過STR鑒定） 2-嘧啶-5-羧乙酯梅螺旋體抗體

乳桿屬雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮苯

短波單胞屬 N-Boc-4-羥基-L-脯甲酯(混旋)苯氫化

硫色曲霉 2--5-甲氧基苯可溶性間粘附分子

解脂假絲酵母解脂變種 2-甲氧基-5-硝基-3-可溶性間粘附分子

雞腿菇 2-硝基-5-溴苯組脫羧

紡織品 4-氨基偶氮苯 2--5-氟三氟甲苯鈣釋放激活鈣通道蛋白

冬青節(jié)桿 5--2-氟-三氟甲苯ORAIL鈣釋放激活鈣通道蛋白

葡萄座腔芐基縮水甘油硫氧還蛋白-2

弗吉尼亞鏈霉 3-溴苯磺酰磷脂D

谷棒桿 3-溴苯脂氧合

鹽漬芽孢桿屬 5-溴-2-嘧啶甲甲酯ERBB受體反饋抑制劑1

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