當前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學試劑>>細胞組織染色>> 鈣鹽染色液(改良茜素紅S法)
貨號 | FS-X10216 |
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培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
中文名稱:鈣鹽染色液(改良茜素紅S法)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:3×50ml
貨號:FS-X10216
產(chǎn)品介紹:
用途: 用于顯示未經(jīng)脫鈣處理的冰凍、石蠟包埋組織及培養(yǎng)的細胞中的鈣鹽染色。 注意事項: 又稱McGee-Russell茜素紅法,鈣沉積物成橙紅色,染色時間取決于鈣的含量,檢測少量鈣時更有效。復染液為mayer蘇木素。 儲存條件:4℃,避光,12個月 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
土地叢毛單胞菌G蛋白偶合受體激1抗體Human TBCB 大鼠角化生長因子(KGF)免疫試劑盒
粉狀畢赤酵母促胃泌釋放肽抗體Human TBX21/T-bet 大鼠角化內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)免疫試劑盒
麥根腐平臍蠕孢磷化G蛋白通路抑制蛋白1抗體Human TDGF1(TeRatocarcinoma-derived growth factor 1) 大鼠膠質(zhì)系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)免疫試劑盒
解烴棒桿菌腦糖原磷化抗體Human NPR2(Atrial natriuretic peptide receptor 2) 大鼠膠原吡啶交聯(lián)(PYD)免疫試劑盒
Fusarium venenatum NirenbergG基丁受體3抗體Human TAP1 大鼠膠原C末端肽(CTX)免疫試劑盒
短小芽孢桿菌G基丁受體α3抗體Human TBCC 大鼠降鈣原(PCT)免疫試劑盒
草木樨中華根瘤菌GEN1蛋白抗體Human MTTP(Microsomal triglyceride transfer protein large subunit) 大鼠降鈣基因相關肽(CGRP)免疫試劑盒
光滑青霉谷酰磷核糖基焦磷?;D移Human TBCD 大鼠降鈣(CT)免疫試劑盒
蜂房哈夫尼菌α-半乳糖抗體Human TBCA 大鼠堿性磷(ALP)免疫試劑盒
豌豆根瘤菌蛋白偶聯(lián)受體55抗體Human TARS2 大鼠堿性成纖維生長因子6(bFGF-6)免疫試劑盒
香菇生長抑制DNA損傷基因45γ抗體 GADD45γHuman TARSL2 大鼠堿性成纖維生長因子4(bFGF-4)免疫試劑盒
孟氏假單胞菌生長停滯特異性蛋白2家族3抗體Human TAF1L 大鼠堿性成纖維生長因子(bFGF)免疫試劑盒
麥根腐平臍蠕孢顆粒K抗體Human TAF1 大鼠甲狀腺抗體(TAb)免疫試劑盒
灰葡萄孢菌*甘油磷二酯磷結構域5抗體Human TAF3 大鼠甲狀腺(T4)免疫試劑盒
球孢白僵菌γ谷酰轉移抗體Human TAF6L 大鼠甲狀腺球蛋白IgG抗體免疫試劑盒
克魯斯假絲酵母G1基丁A型受體α1抗體Human TAF5L 大鼠甲狀腺球蛋白(TG)免疫試劑盒
構巢裸孢殼Emericella│nidulans 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,≥99.0%(GC)鹽益母草堿
地芽孢桿菌Geobacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,≥99.5%(GC)去異波爾定
被孢霉屬Mortierella│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品土荊皮乙
鈣鹽染色液(改良茜素紅S法)谷棒桿 5-溴-2-三氟甲苯干擾
層迭靈芝 2,4,6-三氟苯轉化生長因子
微金放線 媒介紅p62
*鎖擲孢酵母 6-氨基煙甲酯微管相關蛋白輕鏈3II
木拉克酵母 5-吡-2-羧血清淀粉樣蛋白A2
粘孢白僵 4-苯氧基乙白介25
枯草芽孢桿 Nα-(叔丁氧羰基)-τ-對甲苯磺酰基-L-組單類神經(jīng)遞質(zhì)
屎腸球 N-芐氧羰基-DL-亮5′2 羥色
芽孢桿屬 N(α)-Z-L-2,3-二氨基I型膠原蛋白
腫大地桿 2-氨基-3,5-二溴吡啶精氨基琥珀合成
地霉雙足囊 5-氨基-2,4,6-三間苯二甲血清淀粉樣蛋白A1
棒狀乳桿棒狀亞種 1-(2-甲氧苯基)哌Flt3配體
細鏈格孢 N-乙酰-L-谷氨酰脂肪型脂肪結合蛋白4
氣生鞘氨單胞 胍乙糖原合成激
三葉草根瘤 季戊四三烯酯, 300-400ppm 4-甲氧基做穩(wěn)定劑蛋白磷脂
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
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