當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理>>人ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理>> 48T/96T6-OHDA人6-羥多巴胺ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”,選購優(yōu)勢如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標(biāo)齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
產(chǎn)品名稱 | 6-OHDA人6-羥多巴胺ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理 |
英文名稱 | Human 6-hydroxydopamine, 6-OHDA Elisa Kit |
貨號 | FS-H63308 |
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測過程中除正常反應(yīng)外,有時常見到一些錯誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:
①標(biāo)本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過程中請嚴(yán)格按照使用說明操作,必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)!
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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)
Phaeobacrinhibens PhaeobacrinhibensPhaeobacrinhibens分離基物:樣安全等級:1模式菌株:102生長條件:25℃ 純度:>95.0%(GC)
Fulvimarinapelagi FulvimarinapelagiFulvimarinapelagi分離基物:海安全等級:1模式菌株:102生長條件:28℃ 純度:98.0%(T)
Aurantimonascoralicida AurantimonascoralicidaAurantimonascoralicida分離基物:珊瑚礁安全等級:1模式菌株:102生長條件:28℃ 純度:98.0%(T)
Psychrobacillusinsolitus PsychrobacillusinsolitusPsychrobacillusinsolitus分離基物:土壤安全等級:1模式菌株:102生長條件:20℃ 純度:97%
Lactobacillus reuri 羅伊氏乳桿菌Lactobacillus reuri分離基物:人的腸內(nèi)凍干管,斜面培養(yǎng)物安全等級:1分類學(xué)研究。用于益生菌類食品。MRS培養(yǎng)基:酪胨 10.0g,牛肉 8.0g,酵母 4.0 g,葡萄糖 20.0 g,鎂 0.2 g,鈉 5.0 g,檸檬三銨 2.0 g,磷氫二鉀 2.0 g,錳 0.05 g,吐溫80 1.0 g,蒸餾 1000mL。pH6.2±0.2。121℃,15min。傳代方法①凍干管:75%酒精擦拭管壁,后用砂輪在凍干管壁劃兩圈,掰斷,用200μL無菌或培養(yǎng)基:充分溶解,平板涂布,活化培養(yǎng)。 ②斜面:試管口用75%酒精擦拭后,火焰灼燒,后用無菌接種鏟切塊,挑取接入平板或斜面,培養(yǎng)。生長條件:37℃,微好氧存儲條件:2-8℃冷藏,凍干管10年以上,斜面1-3個月。 純度:97%
Oleispiralenta 惰性解油螺旋菌Oleispiralenta分離基物:海,中國海洋大學(xué)安全等級:1模式菌株:no102生長條件:28℃ 純度:98%
Enrococcus faecalis 糞腸球菌(糞鏈球菌)Enrococcus faecalis分離基物:牛奶凍干安全等級:1模式菌株:no研究;發(fā)酵奶營養(yǎng)肉汁瓊脂:蛋白胨 10.0 g,牛肉提取物 3.0 g,NaCl 5.0 g,瓊脂 15.0 g,蒸餾 1.0 L,pH 7.0生長條件:37℃,好氧 純度:98%
Acinetobacr baumannii 鮑曼不動桿菌Acinetobacr baumannii分離基物:凍熟辣整肢蝦凍干物安全等級:2模式菌株:no研究;分析檢測。研究、質(zhì)量控制腦心瓊脂分:心提取物 5.0g,腦提取物 12.5g,月示 胨10.0g,葡萄糖 2.0g,NaCl 5.0g,Na2HPO4 2.5g,瓊脂15.0g,蒸餾1.0L,pH7.4。生長條件:37℃,好氧。生長特性G-桿菌,無動力,精氨雙解酶陰性,氧化酶、尿素酶陰性, ONPG實(shí)驗(yàn)陰性,檸檬鹽試驗(yàn)陽性,不發(fā)酵蔗糖、甘露醇。嚴(yán)格好氧,適pH4.7~7.6。存儲條件:2-8℃,真空冷凍干燥法 純度:98%
6-OHDA人6-羥多巴胺ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理50160人腸微血管內(nèi)皮微RNA2-(氧基)苯胺HHV8/ORF50(Human herpesvirus 8 type P) 人類皰疹病8抗原
50161人腸平滑肌微RNA2-(氧基)苯胺HHV8/ORF50(Human herpesvirus 8 type P) 人類皰疹病8抗原
50190人結(jié)腸平滑肌微RNA仲丁基化鎂HHV8/ORF K2(Human herpesvirus 8 type P) 人類皰疹病8抗原
050190A人肺微血管內(nèi)皮微RNA仲丁基化鎂HIF-1 Beta/ARNT1(Hypoxia-inducible factor-1 Beta) 缺氧誘導(dǎo)因子1β 抗原
50192人肺動脈內(nèi)皮微RNA1-N-Boc-2-基HIF-2 Alpha (Hypoxia-inducible factor-2 Alpha) 缺氧誘導(dǎo)因子2α 抗原
50193人肺動脈內(nèi)皮微RNA1-N-Boc-2-基Histone H1b(Histone H1.4) 組蛋白H1b抗原
50210人肺動脈成纖維微RNA醋阿比特龍HDAC1/HD1(histone deacetylase 1) 組織蛋白去乙酰化酶1抗原
50220人肺泡上皮微RNA阿比特龍F(tuán)lag-Tag (CT) Flag Tag標(biāo)簽多肽
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