當前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>科研細胞>>細胞>> 小鼠胚胎細胞
產(chǎn)地 | 國產(chǎn) | 加工定制 | 是 |
---|---|---|---|
適用領域 | 科研 | 貨號 | FS-01X9682 |
產(chǎn)品屬于:
產(chǎn)品名稱:小鼠胚胎細胞
產(chǎn)品英文:NIH/3T3
貨號:FS-01X9682
細胞培養(yǎng)條件:DMEM+10%小牛血清+1%NEAA+1%丙酮酸鈉+1%L-氨酰胺+1%P/S
生長狀態(tài):貼壁生長
產(chǎn)品規(guī)格:1×106
單位:T25/瓶
是否提供細胞STR鑒定:不提供STR鑒定報告
保存培養(yǎng)溫度(℃)37
運輸溫度(℃):常溫
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞 在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。 2.研究條件可以人為控制 pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。 3.研究的樣本可以達到比較均一性 通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。 4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄 采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。 2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。 3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。 4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。 6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。 7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
人輸血傳播病毒/辛型肝炎病毒((TTV)ELISA試劑盒human transfusion transmitted virus,TTV ELISA Kit
人去加壓/1-去基-8-右旋-精加壓(dDAVP)ELISA試劑盒Human /1-desamino-8-D-arginine vasopressin,dDAVP ELISA Kit
人毒蕈堿型乙酰受體亞型M3(M-AChR M3)ELISA試劑盒Human muscarinic acetylcholine receptor M3,M-AChR M3 ELISA Kit
人毒蕈堿型乙酰受體(M-AChR)ELISA試劑盒 Human muscarinic acetylcholine receptor,M-AChR ELISA Kit
人食欲受體(OXR)ELISA試劑盒Human Orexin receptor,OXR ELISA Kit
人真胰島(TI)ELISA試劑盒 Human true insulin,TI ELISA Kit
人重酒石(NE-B)ELISA試劑盒Human Noradrenaline Bitartas,NE-B ELISA Kit
人前列環(huán)(PGI)ELISA試劑盒 Human prostacycline,PGI ELISA Kit
人反三碘甲狀腺原(rT3)ELISA試劑盒 Human ReverseTri-iodothyronine,rT3 ELISA Kit
人6前列腺F1a(6-keto-PGF1a)ELISA試劑盒Human 6-keto-prostaglandin F1a,6-K-PGF1a ELISA Kit
人戊糖(Pentosidine)ELISA試劑盒Human Pentosidine ELISA Kit
人變腎上腺(MN) ELISA試劑盒Human metanephrine,MN ELISA Kit
人多巴D1受體(D1R)ELISA試劑盒Human Dopamine D1 receptor,D1R ELISA Kit
人腎上腺能a1A受體(ADRA1A)ELISA試劑盒Human adrenergic alpha-1A receptor,ADRA1A ELISA Kit
人早老2(PS-2)ELISA試劑盒 Human Presenilin 2,PS-2 ELISA Kit
人異丙腎上腺(iso-Hyd)ELISA試劑盒 Human Isoprenaline Hydrochloride,iso-Hyd ELISA Kit
人胰抑制(Pancreastatin)ELISA試劑盒 Human Pancreastatin ELISA Kit
人雄受體(AR)ELISA試劑盒 Human androgen receptor,AR ELISA Kit
人松弛/松弛(RLN)ELISA試劑盒 Human Relaxin,RLN ELISA Kit
小鼠胚胎細胞BGP/Osteocalcin 骨保護蛋白/骨鈣抗體規(guī)格: 0.1ml
ChRM3/Acetylcholine receptor(M3) 毒蕈堿型乙酰受體M3抗體規(guī)格: 0.1ml
MSH3 錯配修復蛋白3抗體規(guī)格: 0.2ml
Cystatin A 胱抑A/半蛋白抑制劑A抗體規(guī)格: 0.2ml
SDF-1/CXCL12 基質(zhì)細胞衍生因子1抗體規(guī)格: 0.1ml
Metallothionein 3 金屬硫蛋白3抗體規(guī)格: 0.2ml
HIV1 p55+p24+p17 艾滋病病毒抗體規(guī)格: 0.2ml
MPO/Myeloperoxidase 髓過氧化物抗體規(guī)格: 0.1ml
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實性、準確性和合法性由相關企業(yè)負責,儀表網(wǎng)對此不承擔任何保證責任。
溫馨提示:為規(guī)避購買風險,建議您在購買產(chǎn)品前務必確認供應商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。