酸性磷酸酶染色試劑盒-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9847

中文名稱：酸性磷酸酶染色試劑盒

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：30T

貨號(hào)：FS-X9847

產(chǎn)品介紹:

胞質(zhì)內(nèi)的酸性磷酸酶在酸性條件下，磷酸萘酚AS-BⅠ被細(xì)胞內(nèi)酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)水解產(chǎn)生萘酚AS-BⅠ，再與重氮鹽偶聯(lián)，形成不溶性有色沉淀。

本試劑盒適用于細(xì)胞涂片、細(xì)胞爬片、血涂片、骨髓涂片、冰凍切片及石蠟切片等的染色。陽(yáng)性反應(yīng)為鮮紅色或深紅色顆粒，定位于胞漿當(dāng)中。

儲(chǔ)存條件：2-8℃密封保存。

有效期：三個(gè)月。工作液現(xiàn)用現(xiàn)配，一次用完。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

列齊特英文名： Mizolastine先天性紅生成異常性貧血蛋白1抗體包裝100ml

磺丁脲英文名： Mycophenolate Mofetil癌胚抗原相關(guān)粘附分子16抗體包裝25ml

米格列英文名： Mycophenolate Mofetil癌胚抗原相關(guān)粘附分子21抗體包裝100g

格列奈鈣英文名： Nelarabine貓眼綜合征染色體候選基因5抗體包裝25g

格列奈英文名： Nesiritide AcetateCUE結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體包裝5g

特力利汀;氫替格列汀英文名： Netilmicin Sulfate卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白52抗體包裝1g

鹽二雙胍英文名： Netilmicin Sulfate補(bǔ)體片段C3c抗體包裝5g

(+)-（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Nystatin卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白68抗體(皮膚T淋巴淋巴瘤相關(guān)抗原)包裝5MG

(+)2-基?。?biāo)準(zhǔn)品）英文名： Olanzapine卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白83抗體包裝1g

(+/-)-兒茶精（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Olanzapine卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白21抗體包裝5g

(S)-(+)-（瑞巴林雜質(zhì)）（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Ondansetron HCl卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體(狀狀腺癌編碼蛋白)包裝25g

1,4-對(duì)醌（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Ondansetron HCl周期依賴激2相關(guān)蛋白2抗體包裝5g

1-基海因鹽鹽（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Ornidazole1號(hào)染色體開放閱讀框201抗體包裝100mg

1-基海因（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Ornidazole卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體包裝25g

10％A晶型咪唑英文名： Oxaliplatin卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白80抗體包裝5g

酚節(jié)桿菌Arthrobacter│chlorophenolicus 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,可用于培養(yǎng)血小板衍生生長(zhǎng)因子BB試劑盒野百合堿;Monocrotaline

副豬嗜血桿菌Haemophilus│parasuis 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品血小板衍生生長(zhǎng)因子AA試劑盒鹽育亨賓;Yohimbine hydr

: AS4.360資源名稱: 燼灰鏈霉菌質(zhì)量規(guī)格：>99.0%,培養(yǎng)級(jí)血小板型磷果糖激試劑盒巖白菜;Bengenin
酸性磷酸酶染色試劑盒鐮孢霉 2-硝基-4-異苯O-6-甲基鳥DNA甲基轉(zhuǎn)移

漏斗狀側(cè)耳（鳳尾菇）茴香乙酯O-6-甲基鳥DNA甲基轉(zhuǎn)移

貝爾氏屬 3-氨基-5-噻吩-2-羧甲酯DNA甲基化轉(zhuǎn)移1

類黃假單胞甲基頻哪酯DNA甲基化轉(zhuǎn)移2

葡萄座腔 2-氟-6-三氟DNA甲基化轉(zhuǎn)移3A

粗糙脈孢 4-溴-3-氟DNA甲基化轉(zhuǎn)移3B

喜堿運(yùn)動(dòng)節(jié)桿 5-色鹽鹽基質(zhì)金屬蛋白抑制因子4

蠟樣狀芽孢桿 2,5-二-3-吡啶內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核心信號(hào)1

豬放線桿 3-三氟甲基-5-甲基吡唑傷寒抗原

膜醭畢赤酵母 N-苯基馬來(lái)酰亞抗磷5b

蘇云金芽胞桿 2,3-二氨基-6-甲氧基吡啶鹽鹽甲狀旁腺134

羊肚伴生 4-甲基-5-噻唑基乙己酯氨基端前心鈉肽

黃棕色鏈霉 4-甲基-5-噻唑基乙丁酯含卷曲螺旋域蛋白49

德爾布有孢酵母 N--3,4-亞甲二氧基苯鹽鹽酮脫氫

乳桿 1-甲基-3-苯基硫酚

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