改良Bielschowsky神經(jīng)染色液-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10067

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：改良Bielschowsky神經(jīng)染色液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：5×50ml

貨號(hào)：FS-X10067

產(chǎn)品介紹:

用途：

神經(jīng)纖維和神經(jīng)元的染色，又稱為皮爾蘇斯基氏染色液，石蠟切片

注意事項(xiàng)：

染色結(jié)果為：神經(jīng)元軸突和神經(jīng)纖維成黑色。

儲(chǔ)存條件：4℃，避光，3個(gè)月

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

楊鏈格孢蕈堿型乙酰受體M2抗體Human ADAMTS4(A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 4) 人谷[NMDA]受體亞基ε-2(NR-2)抗體免疫試劑盒

耶納農(nóng)球菌促進(jìn)凋亡基因抗體Human CHRM3(Muscarinic acetylcholine receptor M3) 人谷[NMDA]受體亞基ε-2(NR-2)免疫試劑盒

Paenibacillus agarexedens原癌基因蛋白/活化蛋白1抗體Human KSR2(Kinase suppressor of Ras 2) 人孤腓肽(OFQ/N)免疫試劑盒

香栓孔菌死亡活化蛋白抗體Human VCL(Vinculin) 人鉤端螺旋體IgM(Lebtospira)免疫試劑盒

釀酒酵母角蛋白19抗體Human VCAN(Versican core protein) 人鉤端螺旋體IgG(Leptospira)免疫試劑盒

木蘭假絲酵母角蛋白2抗體Human KRT17(KeRatin, type I cytoskeletal 17) 人弓蛔蟲(chóng)(Tc)抗體(IgG)免疫試劑盒

青霉屬角蛋白4抗體Human TNNT1(Troponin T, slow skeletal muscle) 人庚型肝炎病抗體(IgM)免疫試劑盒

色b245輕鏈抗體Human S100A9(Protein S100-A9) 人庚型肝炎病(HGV)抗原免疫試劑盒

乳粉克羅諾桿菌屬（阪崎腸桿菌）（定量） 5號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框44抗體Human NFKB1(Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit) 人庚型肝炎病(HGV)抗體(IgG)免疫試劑盒

節(jié)桿菌屬心臟特異性絲蛋白抗體Human S100A8(Protein S100-A8) 人睪(T)免疫試劑盒

盤多毛孢胞漿型磷脂A2抗體Human CA1(Carbonic anhydrase 1) 人高香草(HVA)免疫試劑盒

變異鏈霉菌周期及凋亡調(diào)節(jié)蛋白1抗體Human NMS(Neuromedin-S) 人高危型狀瘤病衣殼蛋白L1(HR-HPVL1)抗體(IgG)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌神經(jīng)粘附分子1抗體Human TPT1(Translationally-controlled tumor protein) 人高鐵血紅蛋白(MHB)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌緊密連接蛋白5抗體Human MCM2(DNA replication licensing factor MCM2) 人高糖基化人絨毛膜促性腺激(hCG)免疫試劑盒

亮桿菌屬富含半胱運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元蛋白1抗體Human IL32(Interleukin-32) 人高敏狀腺原(u-T3)免疫試劑盒

釀酒酵母角蛋白5+6抗體Human S100A6(Protein S100-A6) 人高敏甲狀腺(u-T4)免疫試劑盒

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.8%纈草三酯

平滑假絲酵母Candida│parapsilosis 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品異性南五味子丁

尼安薩沙門氏菌Salmonella│nyanza 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%乙酰哈巴
改良Bielschowsky神經(jīng)染色液馬克斯克魯維酵母己烯雌絲棕櫚酰轉(zhuǎn)移長(zhǎng)鏈堿性亞基1

鞘氨盒屬 2-氟-3-硝基-5-吡啶冠蛋白1A

產(chǎn)氣腸桿丁球蛋白κ

假單胞屬 4-溴-3-甲基-5-(三氟甲基)-1H-吡唑?yàn)V泡型轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1

馬闊里類芽孢桿二乙基異基萊姆病

球孢白僵 3-甲酯抗單核抗體

枯草芽孢桿 2-甲基丁π--S-轉(zhuǎn)移

球孢鏈霉 2,3-二天冬酰合成

平菇甘鹽鹽肌

玫煙色棒束孢新戊?；银B(niǎo)一磷

腐皮殼 3,3'-二氨基二苯砜脂肪轉(zhuǎn)位

熱帶假絲酵母 3-溴-2-氟甲苯人白介2受體α亞基

大西洋魯杰氏 D-氫化乳清延胡索水合

滑菇甘氨膽水合物1,4,5-三磷肌

缺陷短波單胞 L-氫化乳清核酮糖-1,5-二磷羧化；加氧
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)