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貨號 | FS-X9990 |
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中文名稱:檸檬酸鹽脫鈣液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:500ml
貨號:FS-X9990
產(chǎn)品介紹:
用途: 緩慢脫鈣液,對組織無明顯損壞,若無時間要求,推薦用此方法。 注意事項: 檸檬酸、檸檬酸鈉、硫酸鋅和水組成 儲存條件:室溫,12個月 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
白僵菌21號染色體開放閱讀框62抗體Human VACM-1(Cullin 5) 人血管緊張1-7(Ang1-7)免疫試劑盒
傳染性喉氣管炎病磷化胞漿型磷脂A2抗體Human TSC2(Tuberous Sclerosis Protein 2) 人血管活性腸肽(VIP)免疫試劑盒
釀酒酵母9號染色體開放閱讀框46抗體Human Rbx2(RNF7) 人血管動蛋白(AMOT)免疫試劑盒
矩圓黑盤孢20號染色體開放閱讀框103抗體Human CD72(B-cell differentiation antigen) 人旋毛蟲抗體(Trichinella Ab)免疫試劑盒
硬水黃桿菌9號染色體開放閱讀框86抗體Human anti 21-OH Ab(anti 21-hydroxylase antibody) 人溴脫氧核(BrdU)免疫試劑盒
中型艾美耳球蟲鈣粘附分子18抗體Human Asprosin 人雄烯二(ASD)免疫試劑盒
平菇CD276抗體Human 8-iso-PGF2α(8-isoprostane) 人雄烯二免疫試劑盒
21號染色體開放閱讀框25抗體Human anti-EPO antibody(anti-Erythropoietin antibody) 人雄激受體(AR)免疫試劑盒
球孢白僵菌22號染色體開放閱讀框36抗體Human fFN(fetal Fibronectin) 人胸腺依賴性抗原(TD-Ag)免疫試劑盒
假蜜環(huán)菌(亮菌)補體組分1q子成分樣蛋白1抗體Human LIPE(Hormone-sensitive lipase) 人(TP-5)免疫試劑盒
1B2A3 CD44抗體Human 2, 5-OAS(2, 5-oligoadenylate synthetase) 人β4(Thymosin β4)免疫試劑盒
黃薄芝9號染色體開放閱讀框114抗體Human MDA(Malonyldehyde) 人α1(Thymosin α1)免疫試劑盒
大腸桿菌CD8β鏈(CD8-β)抗體Human IL-12RB1(Interleukin-12 receptor subunit beta-1 78) 人胸腺嘧啶核磷化(TP)免疫試劑盒
銅綠假單胞菌(綠膿桿菌)6號染色體開放閱讀框1抗體Human NPTN(Neuroplastin) 人胸腺基質(zhì)淋巴生成(TSLP)免疫試劑盒
考克氏菌γ晶狀體蛋白S/γS-crystallin抗體Human AP12(Apelin 12) 人胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(TARC/CCL17)免疫試劑盒
解脂假絲酵母解脂變種9號染色體開放閱讀框72抗體Human HGS(Hepatocyte growth factor-regulated tyrosine kinase substRate) 人胸腺非依賴性抗原(TI-Ag)免疫試劑盒
勞地毛霉Mucor│lausannensis 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BREB病衣殼抗原試劑盒4-磺?;蔓}鹽
小孢矛束霉Doratomyces│microsporus 質(zhì)量規(guī)格:>98%,進分EB病衣殼抗原試劑盒茴香腦
#膠質(zhì)芽孢桿菌Bacillus│mucilaginosus Avakyan et al 1998 質(zhì)量規(guī)格:>98%(HPLC),BREB病核抗原3A抗體試劑盒高熊果
檸檬酸鹽脫鈣液產(chǎn)色鏈霉 噻托溴一水合物脂氧合同工2
三葉草根瘤 Zanamivir脂氧合同工3
馬賽 2-戊基乙酰乙乙酯脂氧合同工4
微扁沃利雅炭皮 Brinzolamide腫瘤標志物
異常漢遜酵母異常變種 GalantideCD56分子
草木樨中華根瘤 4-芐氧基-3-甲氧基苯甲5-羥色受體2A
茶新菇 Mozavaptan轉(zhuǎn)谷氨酰
乙假絲酵母 CO-1686 (AVL-301)酪蛋白κ
枯草芽孢桿 凝血受體酪蛋白α
枯草芽孢桿枯草亞種 GSK2636771酪蛋白β
西蕃蓮莖基腐病 PACAP(6-38), human, ovine, ratⅩ組磷脂A2
多根硬皮馬勃 PRT062607 (P505-15, BIIB057) HCl甘露聚糖結(jié)合凝集絲肽-3
炭疽芽胞桿 磷脂酰肌糖生物合成類F蛋白
谷棒桿Ⅲ型 SAR245409 (XL765)肌3磷合成
果生鏈核盤 GSK126肌
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