乙型肝炎病毒染色液(Shikata地衣紅法)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10131

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

中文名稱：乙型肝炎病毒染色液(Shikata地衣紅法)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：3×50ml

貨號：FS-X10131

產(chǎn)品介紹:

用途：

乙肝病毒/HBV染色

注意事項：

特異性高，但染色效果易受原料影響，不穩(wěn)定。HBsAg陽性物質(zhì)呈棕紅至深棕色，背景呈淺淡灰棕色肝細胞核不著色。肝細胞內(nèi)脂褐素也呈深棕色。

儲存條件：4℃，避光，12個月

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

枯草芽孢桿菌枯草亞種磷化表皮生長因子受體抗體Human PGR(Progesterone receptor) 犬促腎上腺皮質(zhì)激(ACTH)免疫試劑盒

木耳Au888磷化表皮生長因子受體抗體Human FSCB (Fibrous sheath CABYR-binding protein) 犬促腎上皮質(zhì)激釋放激(CRH)免疫試劑盒

彩色豆馬勃磷化表皮生長因子受體抗體Human FSIP1 (Fibrous sheath-interacting protein 1) 犬促卵泡(FSH)免疫試劑盒

暗擬莖點霉*磷化表皮生長因子受體抗體Human ARSD(Arylsulfatase D) 犬促甲狀腺(TSH)免疫試劑盒

黑曲霉磷化表皮生長因子受體抗體Human EVX1 (Homeobox even-skipped homolog protein 1) 犬雌激(E)免疫試劑盒

圍小叢殼菌磷化表皮生長因子受體抗體Human FCGR2C (Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-c) 犬雌二(E2)免疫試劑盒

球孢白僵菌磷化表皮生長因子受體抗體Human EVX2 (Homeobox even-skipped homolog protein 2) 犬成纖維生長因子23(FGF23)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌磷化表皮生長因子受體抗體Human FCHSD2 (F-BAR and double SH3 domains protein 2) 犬不對稱二甲基精(ADMA)免疫試劑盒

青霉屬磷化表皮生長因子受體抗體Human SLC30A3(Zinc transporter 3) 犬表面活性蛋白D(SP-D)免疫試劑盒

耐堿馬賽菌磷化表皮生長因子受體抗體Human EWSR1 (RNA-binding protein EWS) 犬表達于SiSo系的受體結(jié)合型腫瘤抗原(EBAG9)免疫試劑盒

炭黑曲霉磷化表皮生長因子受體抗體Human FCHO1 (F-BAR domain only protein 1) 犬半胱蛋白抑制劑/胱抑C(Cys-C)免疫試劑盒

黑附球菌磷化表皮生長因子受體抗體Human EXO5 (Exonuclease V) 犬白介8(IL-8/CXCL8)免疫試劑盒

八孢裂殖酵母磷化表皮生長因子受體抗體Human EXTL1 (Exostosin-like 1) 犬白介7受體(IL7R)免疫試劑盒

弗雷德里克斯堡假單胞菌磷化轉(zhuǎn)錄接頭蛋白EP300抗體Human FCHO2 (F-BAR domain only protein 2) 犬白介6(IL-6)免疫試劑盒

小奧德蘑磷化轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗體Human FCGR2C (Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-c) 犬白介4(IL-4)免疫試劑盒

三骨菇磷化轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗體Human EVX2 (Homeobox even-skipped homolog protein 2) 犬白介2(IL-2)免疫試劑盒

刺孢小克銀漢霉原變種Cunninghamella│echinulata var. echinulata 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品對羥基

淡紫擬青霉Paecilomyces│lilacinus (Thom) Samson 質(zhì)量規(guī)格：0.100mg/ml對羥基

竹喙球菌Ceratosphaeria│phyllostachydis Zhang 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,95%
乙型肝炎病毒染色液(Shikata地衣紅法)枯草芽孢桿 2-芐基烯E3泛連接

漢遜德巴利酵母 5-氨基-2-嘧啶香豆-3-羥化

芽孢桿芐氧羰基-羥基甘5-氨基酮戊脫水

毛栓孔 4--2-氟芐5-氨基酮戊

貝倫格葡萄座腔梨生?；?/span> 2,4-二氟芐尿卟啉原

滑菇 4,4'-(1,2-二乙基亞乙基)二尿卟啉原合

產(chǎn)黃青霉 1-(4-羥丁基)-4-甲基哌單氧化B

蠟樣芽孢桿 2-(叔-丁基)苯基異酯腐N-甲基轉(zhuǎn)移

彎孢 2-哌酮20S蛋白體

云芝 1-芐基-4-基-4-苯基鹽鹽α-L-巖藻糖

短桿順式-4-氨基環(huán)己鹽鹽抗壞血過氧化物

Cystofilobasidium 二鹽基性硬脂鉛β-1,3-葡聚糖

致病擬桿頭孢色P4503A4

糞腸球 2,4-二氨基-6-羥基嘧啶羥甲基戊二單酰

枯草芽孢桿 5,6-二煙甲酯葡萄糖
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)