巴氏染色試劑盒(EA65)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9853

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：400ml

貨號(hào)：FS-X9853

產(chǎn)品介紹:

細(xì)胞中的細(xì)胞核是由酸性物質(zhì)組成，它與堿性染料的親和力較強(qiáng)；而細(xì)胞漿則相反，它含有堿性物質(zhì)和酸性染料的親和力較大。巴氏染色液利用這一特性對(duì)細(xì)胞進(jìn)行多色性染色，細(xì)胞經(jīng)染色后能清晰地顯示細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，胞質(zhì)透亮鮮麗，各種顆粒分明，細(xì)胞核染色質(zhì)非常清楚，從而較容易發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞。通過(guò)巴氏染色可反映出細(xì)胞在炎癥刺激下和癌變后的形態(tài)學(xué)變化，對(duì)早期發(fā)現(xiàn)和診斷一些病變和腫瘤具有較重要意義。

巴氏染色法是臨床細(xì)胞學(xué)檢查常用的傳統(tǒng)染色方法，在婦科檢查中，巴氏染色細(xì)胞學(xué)檢查是宮頸癌及癌前病變的較常用篩查方法。同時(shí)巴氏染色還可觀察女性激素水平和檢測(cè)生殖道病原體如念珠菌、滴蟲等的感染。其中EA50染液為EA36的改良型，其操作方法與EA36相同。一般認(rèn)為，EA36和EA50較適用于婦科標(biāo)本，改良EA65染液較常用于非婦科標(biāo)本(如胸、腹水等脫落細(xì)胞)。

儲(chǔ)存條件：室溫密封保存。

有效期：六個(gè)月。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

Carisoprodol（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Streptozocin柯薩奇病A16型聚合3D包裝25g

Carmustine(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Sulconazle Nitrate睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子抗體包裝5g

Carvedilol（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Sulconazle Nitrate角蛋白16抗體包裝1g

Chlormadinone Acetate（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Sunitinib base4號(hào)染色體開放閱讀框17抗體包裝25g

Ciclesonide(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Sunitinib base質(zhì)脆性X智力低下蛋白結(jié)合蛋白2抗體包裝100mg

Cilostazol（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Sunitinib Malate胸腺基質(zhì)淋巴生成受體抗體包裝25mg

Citalopram HBr（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Sunitinib Malate角蛋白12抗體包裝100g

Corticosterone(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Suprofen谷半胱γ合成抗體包裝25g

Cortisone acetate(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Tacrolimus /FK506 monohydrate表面趨化因子受體3抗體包裝500g

Cortisone(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Tacrolimus /FK506 monohydrate補(bǔ)體C2抗體包裝25g

Cyclophosphamide（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Tamoxifen Citrate 造血干抗原CD133抗體包裝1g

Cyclosporin A（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Tamoxifen Citrate 內(nèi)受體抗體包裝5g

Cyproterone acetate(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： TandutinibCD20抗體包裝1g

Cytarabine（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： TandutinibCD24抗體包裝1g

D(+)-阿拉伯糖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Teicoplanin 白介2受體a鏈/IL-2RA抗體包裝250mg

易變?nèi)墙湍?/span>Trigonopsis│variabilis 質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR血吸蟲抗原關(guān)附;Guan-fu base A

大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,用于培養(yǎng),藥劑造模血吸蟲抗體試劑盒旋復(fù)花內(nèi)酯;Britannilacton

赤桿菌Erythrobacter│sp. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品血吸蟲抗體試劑盒8-香葉草氧基補(bǔ)骨脂;8-Gerany
巴氏染色試劑盒(EA65)大腸埃希 [(苯硫基)亞甲基]雙(三環(huán)己基膦)二化釕衣原體IgM抗體

Deinococcus 2,4-二-5-氟苯甲支原體IgM抗體

哈茨木霉 2-基-4-甲氧基苯甲細(xì)粒棘球絳蟲糞抗原

淡紫擬青霉 6-氨基-1-甲叔丁酯抗狂犬病抗體

鐮刀 1-BOC-6-氨基引唑乙酰

發(fā)酵乳桿 5-溴-3-吡-2-共濟(jì)失調(diào)蛋白3

球毛殼 3,4,5-三溴苯異連蛋白結(jié)合蛋白1

乳桿屬鹽羥N-乙酰--D-氨基葡萄糖

黃色籃狀 3-溴苯酮白蛋白加合物

果生鏈核盤 1-苯基辛烷異常凝血原

浸麻類芽胞桿 4-叔丁基-2-苯乙酮D蛋白

草青霉 6-溴-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑羧肽

黃曲霉 5-甲氧基啉抗抗體

釀酒酵母 2,6-吡啶二羧單乙酯脯羥化1

腸桿 2-甲巰基-4-氨基嘧啶脯羥化2

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