細(xì)胞膜染色試劑盒(紅色熒光)-M02-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9858

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：1000T|5000T

貨號：FS-X9858

產(chǎn)品介紹:

M02細(xì)胞膜染色試劑盒是利用M 系列探針進(jìn)行溶酶體特異性染色的試劑盒。本試劑盒中的M02細(xì)胞膜染色探針為紅色熒光標(biāo)記的細(xì)胞膜探針，具有644/663nm的大激發(fā)/發(fā)射波長。

M系列探針是對活細(xì)胞的細(xì)胞膜進(jìn)行選擇性染色的一類熒光染料，該系列探針可以選擇性標(biāo)記細(xì)胞膜。當(dāng)親脂性的紅色熒光探針M02 進(jìn)入細(xì)胞膜后，在整個細(xì)胞膜上擴(kuò)散，佳濃度時可以使整個細(xì)胞膜染色。染色液M02在進(jìn)入細(xì)胞膜之前熒光非常弱，當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng)，被激發(fā)后可以發(fā)出紅色的熒光，具有很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。

熒光探針M02通常不會明顯影響細(xì)胞的活力，因此被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經(jīng)等細(xì)胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑(long-term tracer)。除了簡單的細(xì)胞膜熒光標(biāo)記外，還可以用于檢測細(xì)胞的融合和粘附，檢測發(fā)育或移植過程中細(xì)胞遷移，通過FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)檢測脂在細(xì)胞膜上的擴(kuò)散，檢測細(xì)胞毒性和標(biāo)記脂蛋白等。

M系列細(xì)胞膜探針具有多種顏色可以選擇，可根據(jù)情況對樣品進(jìn)行多色標(biāo)記實驗。除了本試劑盒的紅色熒光探針，我公司還可以提供綠色、橙色、深紅色等顏色的染色試劑盒。

儲存條件：染料-20℃避光保存；避免反復(fù)凍融；稀釋液2-8℃保存。

有效期：六個月。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

L-腎上腺(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Sumatriptan succinate 耐藥相關(guān)蛋白9抗體包裝5g

L-絲(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Streptomycin Sulphate22號染色體開放閱讀框40抗體包裝1g

L-天門冬(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Streptomycin Sulphate嗜粒趨化蛋白3抗體包裝1g

L-巖藻糖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Dihydrostreptomycin Sulphate21號染色體開放閱讀框33抗體包裝250mg

L-異亮（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Diclofenac sodium角蛋白15抗體包裝5ml

Lenalidomide（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Diclofenac sodium角蛋白14抗體包裝1g

Letrozole（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Gabapentin神經(jīng)NB3特定蛋白抗體包裝1g

Levonorgestrel（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Gabapentin促胃泌受體抗體包裝5g

Loperamide HCl(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Domperidone單克抗體包裝1g

Losartan Potassium英文名： Domperidone2號染色體開放閱讀框72抗體包裝5g

m-酚-4-磺(聚酚磺雜質(zhì))（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Niclosamide間粘附分子3抗體包裝1g

m-酚-4，6-二磺（聚酚磺雜質(zhì)）（標(biāo)準(zhǔn)品...英文名： Niclosamide染色質(zhì)結(jié)合蛋白Cbx8抗體包裝1g

m-酚-6-磺(聚酚磺雜質(zhì))（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Ciprofloxacin降鈣抗體包裝25g

MB1120-S英文名： Ciprofloxacin降鈣基因相關(guān)肽1型受體抗體包裝5g

Medroxyprogesterone acetate...英文名： FamciclovirCD19抗體包裝500mg

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%血漿激肽釋放試劑盒L-纈;L-Valine

: JCM13471資源名稱: DSMZ17855, Type strain 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品血漿α顆粒膜蛋白試劑盒香草;4-hydroxy-3-meth

彩色豆馬勃Pisolithus│tinctorius (Pers.) Coker & Couch 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR血紅氧合2試劑盒雪松;Cedrol
細(xì)胞膜染色試劑盒(紅色熒光)-M02釀酒酵母 1-N-BOC-4-乙?；蚣る脑?

糙皮側(cè)耳 2,4,6-三氟異硫苯酯彈性蛋白

佐久氏沙雷氏 3-苯氧基苯甲酰肼DNA甲基化轉(zhuǎn)移3A

總狀毛霉 1-丁基-3-氟苯DNA甲基化轉(zhuǎn)移3B

釀酒酵母反式-2-三氟甲基肉桂副流感病

稻黑孢霉 (二甲基氨基)二甲基(2,3,4,5,6-五氟苯氧基)亞六氟磷鹽抗磷脂酰絲抗體

缺陷短波單胞 3-吡啶-2-甲核外切1

無 5--2-苯并噻唑啉酮核外切1

靈芝(紅芝，赤芝)（可訂購） 2-羥基-3-基吡啶耳石蛋白1

孟氏假單胞 2-氟-4-橋粒芯蛋白3IgG

孢吸水鏈霉 5-溴-2--4-(苯氧基)-嘧啶蛋白精脫亞氨4

白井盤多毛孢 3-基-5-硝基三氟甲苯瓜化抗凝血

凝結(jié)芽胞桿 Fmoc-D-3-基苯c-fos

金產(chǎn)色鏈霉 Fmoc-L-3-基苯色C

蟲草屬 Fmoc-D-2-苯可溶性內(nèi)皮生長因子

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