綠色標(biāo)本保色液(慢速)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10205

產(chǎn)品介紹:

用途：

利用硫酸銅、等藥液慢理

注意事項(xiàng)：

處理時(shí)間長，經(jīng)此法處理后用液可以長期保存。在制作保色浸制標(biāo)本后，瓶口要用石蠟或者凡士林密封嚴(yán)實(shí)，并避免陽光直射。

儲(chǔ)存條件：室溫，12個(gè)月

中文名稱：綠色標(biāo)本保色液(慢速)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100ml|500ml

貨號(hào)：FS-X10205

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

暗蓋淡鵝膏菌GA結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)錄因子α/GABP-α抗體Human TMEM16A/DOG1 大鼠皮質(zhì)(Cortisol)免疫試劑盒

巨大芽胞桿菌GA結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)錄因子β/GABP-β1/GABP-β2抗體Human TMEM175 大鼠牛血清白蛋白(BSA)抗體(IgG)免疫試劑盒

耐久腸球菌谷脫羧65+谷脫羧67抗體Human TMEM173(Transmembrane protein 173) 大鼠XIV(FXIV/protein C)免疫試劑盒

塔賓曲霉谷脫羧樣蛋白1抗體Human TMEM176A 大鼠IX(FIX)免疫試劑盒

分枝節(jié)桿菌葡萄糖-6-磷3/G6Pase-β抗體Human TMEM102 大鼠Ⅻ(FⅫ)免疫試劑盒

淺天青鏈霉菌α葡萄糖/溶體α-葡糖抗體Human TMEM176B 大鼠ⅩⅢ(FⅩⅢ)免疫試劑盒

Sporosarcina生長因子受體結(jié)合蛋白2相關(guān)蛋白3抗體Human TMEM108 大鼠Ⅹ(FⅩ)免疫試劑盒

盤長孢狀盤孢生長因子受體結(jié)合蛋白2相關(guān)蛋白4抗體Human TMEM161A 大鼠Ⅱ(FⅡ)免疫試劑盒

淺白隱球酵母G基丁受體pi/GABAA Rπ抗體Human TMEM168 大鼠凝血原片段F1+2(F1+2)免疫試劑盒

豌豆根瘤菌磷化G基丁B型受體2抗體Human TMEM165 大鼠凝血受體(TR)免疫試劑盒

棉阿舒囊霉G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合蛋白α11/Gα 11 抗體Human TMEM16A/DOG1 大鼠凝血抗凝血復(fù)合物(TAT)免疫試劑盒

Lactobacillus brevisG3BP2蛋白抗體Human TLE1 大鼠凝血抗凝血Ⅲ復(fù)合物(TAT-III)免疫試劑盒

檸檬色短小桿菌γ基丁運(yùn)載蛋白2抗體Human TMEM173(Transmembrane protein 173) 大鼠凝溶膠蛋白(Gelsolin)免疫試劑盒

游動(dòng)放線菌*β1-6 N-乙酰基葡萄糖轉(zhuǎn)移3抗體Human ITIH1(Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H1) 大鼠凝聚(CLU)免疫試劑盒

格氏嗜鹽堿桿菌β1-6 N-乙?；咸烟寝D(zhuǎn)移7抗體Human TM7SF3 大鼠檸檬合(CS)免疫試劑盒

大腸埃希菌γ-微管蛋白GCP4抗體Human TM9SF4 大鼠尿液三葉因子3(TFF-3)免疫試劑盒

棲珊瑚假交替單胞菌Pseudoalteromonas│paragorgicola 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品基蓮心堿

貝倫格葡萄座腔菌Botryosphaeria│berengeriana De Not. 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品基酞

灰葡萄孢Botrytis│cinerea 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品桑皮C
綠色標(biāo)本保色液(慢速)天藍(lán)色鏈霉* 硝鉻(III)九水合物胸腺β10

草鹽貪銅鉬鋇幽門螺旋桿

梭 3,5-二甲基-4-羥基苯甲多囊腎蛋白1

生金鏈霉 N-(4-苯甲?；?-酪可溶性彈性蛋白片段

硝孢鏈霉 L-蘇糖鎂肌球蛋白重鏈

雜色曲霉原變種 4-二苯基苯甲葡萄糖

釀酒酵母惕各香葉酯1,25二羥基維生D

多根硬皮馬勃亞硫烯酯維生B12

氏假單胞 2,5-二溴噻唑甜菜堿

大豆慢生根瘤亞硝銀磷甘油酯

德爾布有孢酵母丁二二酰肼粘蛋白5AC

大西洋交替紅色桿氟化錫(II)S-腺蛋

釀酒酵母苯草酮s腺同型半胱

白側(cè)耳鄰羥基對氨基甲酯

平菇 2-氨基-3-甲酯球蛋白G抗體

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