當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> Kovac試劑
貨號(hào) | FS-X10133 |
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中文名稱:Kovac試劑
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100ml|500ml
貨號(hào):FS-X10133
產(chǎn)品介紹:
用途: 又稱柯氏試劑或吲哚試劑,用于吲哚實(shí)驗(yàn)。 注意事項(xiàng): 陽性呈紅色,即形成玫瑰吲哚,屬于一種顯色反應(yīng)試劑,主要成分為對二甲等。 儲(chǔ)存條件:室溫,避光,12個(gè)月 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
弗雷德里克斯堡假單胞菌上皮有絲分裂蛋白抗體Human EPS8L1 (Epidermal growth factor receptor kinase substrate 8-like protein 1) 犬S100B蛋白(S100B)免疫試劑盒
不吸水鏈霉菌Emerin蛋白抗體Human ELSPBP1 (Epididymal sperm-binding protein 1) 犬P選擇(SELP)免疫試劑盒
寄生孢外信號(hào)調(diào)節(jié)激5抗體Human ERN2 (Serine/threonine-protein kinase/endoribonuclease IRE2) 犬P物質(zhì)受體(TACR1)免疫試劑盒
巨大曲霉磷/磷二酯家族成員5抗體Human EPS8L3 (Epidermal growth factor receptor kinase substrate 8-like protein 3) 犬N-乙酰-β-D-基葡萄糖(NAG)免疫試劑盒
禾粘座孢霉(或禾漆斑菌)早期生長反應(yīng)蛋白2抗體Human EPC1 (Enhancer of polycomb homolog 1) 犬N端前心鈉肽(NT-ProANP)免疫試劑盒
鹽水鹽土生古菌磷化雌激受體β抗體Human ERAS (GTPase ERas) 犬N端前腦鈉(NT-proBNP)免疫試劑盒
豬丹絲菌乙激β抗體Human ECHDC1 (Ethylmalonyl-CoA decarboxylase) 犬KI-67抗原(MKI67)免疫試劑盒
栗疫菌微管相關(guān)末端結(jié)合蛋白2抗體Human ERRFI1(ERBB receptor feedback inhibitor 1) 犬I 型膠原蛋白免疫試劑盒
波恩佩島蒼黃色桿菌減數(shù)分裂內(nèi)切EME1抗體Human EVPL (Envoplakin) 犬E選擇(SELE)免疫試劑盒
木霉延伸突觸蛋白2抗體Human ENOSF1 (Mitochondrial enolase superfamily member 1) 犬C肽(C-Peptide)免疫試劑盒
膠孢延伸突觸蛋白1抗體Human ERAS (GTPase ERas) 犬C反應(yīng)蛋白(CRP)免疫試劑盒
紅根須腹菌紅膜蛋白4.2抗體Human TYROBP(TYRO protein tyrosine kinase-binding protein) 犬CD8分子(CD8)免疫試劑盒
南類芽孢桿菌轉(zhuǎn)錄因子ELYS蛋白抗體Human ENOSF1 (Mitochondrial enolase superfamily member 1) 犬CD6分子(CD6)免疫試劑盒
芽孢桿菌內(nèi)皮粘蛋白EMCN抗體Human ERRFI1(ERBB receptor feedback inhibitor 1) 犬CD4分子(CD4)免疫試劑盒
串珠鐮孢環(huán)磷腺調(diào)節(jié)鳥核交換因子1抗體Human DSCAM (Down syndrome cell adhesion molecule homolog) 犬CD31分子(CD31)免疫試劑盒
灰平鏈霉菌磷化轉(zhuǎn)錄因子E2F1抗體Human EDARADD (Ectodysplasin-A receptor-associated adapter protein) 犬CC趨化因子受體2(CCR2)免疫試劑盒
: 10002資源名稱: 滄州擬諾卡氏菌 質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=2%D-阿拉伯糖
: K85/39資源名稱: 西蘭地沙門氏菌 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=2%L-組鹽鹽
亞鐵氧化硫桿狀菌Acidithiobacillus│ferrooxidans 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品L-組
Kovac試劑松鼠葡萄球 4-溴芐脒鹽鹽百香果木質(zhì)化病
Pseudomonas batumici 3-羥基吡-2-酰葡萄糖氧化
少孢哈薩克斯坦酵母 1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-烯-1-酮泛化蛋白
玫煙色棒束孢 3,4-二氫-2(1H)-喹啉酮木葡聚糖內(nèi)轉(zhuǎn)糖
Bacillus sp. 3-甲氧基-2-甲抗性淀粉
海假交替單胞 3-氨基異煙甲酯抗超氧陰離子
多主葡萄殼 原卟啉二甲酯磷脂磷
芽胞桿 6-甲基吡-2-羧泛激活E3
多粘類芽孢桿 1,2,3,4-四氟苯延胡索
金黃色葡萄球金黃亞種 3-(2,4-二)鯊烯-2,3-環(huán)氧化物
釀酒酵母 4-甲基哌-1-甲酰鹽鹽O-乙酰絲硫水解
枯草芽孢桿 甘油磷酯二鈉鹽水合物(異構(gòu)體混合物)T4多聚核激
雞新城疫病血凝抑制試驗(yàn)(HI)陽性血清 2-乙基-3,5(或3,6)-二甲基吡脂氧合
黑曲霉 環(huán)基色P450氧化還原
黃桿 L-脯叔丁酯鹽鹽色P450氧化還原
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