當(dāng)前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>ELISA試劑盒實驗原理>>人ELISA試劑盒實驗原理>> 48T/96TACH人乙酰膽堿ELISA試劑盒實驗原理
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公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”,選購優(yōu)勢如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強
4適用于體液、組織勻漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標(biāo)齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
產(chǎn)品名稱 | ACH人乙酰膽堿ELISA試劑盒實驗原理 |
英文名稱 | Human acetylcholine, ACH Elisa Kit |
貨號 | FS-H63324 |
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測過程中除正常反應(yīng)外,有時常見到一些錯誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:
①標(biāo)本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實驗過程中請嚴(yán)格按照使用說明操作,必能得出準(zhǔn)確的實驗結(jié)果,可提供免費技術(shù)咨詢服務(wù)!
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)
樣本實驗前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
Rhizopus stolonifer(Ehrenberg:Fries)Lind 匍枝根霉Rhizopus stolonifer(Ehrenberg:Fries)Lind凍干安全等級:1模式菌株:no綜合PDA瓊脂:馬鈴薯煮液 1.0L,葡萄糖 20.0g,KH2PO4 3.0g,MgSO4·7H2O 1.5g,維生素B1 微量,瓊脂 20.0g,pH 6.0±0.2。生長條件:25-28℃,好氧,4d 純度:98%
Aspergillussydowii(Bain.Etsart.)Thometchurch 聚多曲霉(薩氏曲霉)Aspergillussydowii(Bain.Etsart.)Thometchurch安全等級:1模式菌株:no除光學(xué)含儀器外的防霉試驗菌種。15生長條件:25-28℃ 純度:98%
Alrnaria alrnata (Fries) Keissler 鏈格孢Alrnaria alrnata (Fries) Keissler斜面安全等級:1模式菌株:no除光學(xué)儀器外的防霉試驗菌種。綜合PDA:馬鈴薯煮汁1000mL,磷二氫鉀 3g,鎂 1.5g,葡萄糖 20g,維生素B1 10mg,瓊脂 20g,pH自然。馬鈴薯煮液:200g馬鈴薯,去皮,切塊,放入蒸餾中煮沸30min,取濾液定容至1000mL,備用。121℃,15min。生長條件:25-28℃,好氧,5-7天 純度:99%
RhizopusoryzaeWentPrinsen-Geerligs 米根霉RhizopusoryzaeWentPrinsen-Geerligs安全等級:1模式菌株:no產(chǎn)乳和延胡索14,17生長條件:25-28℃ 純度:99%
Paecilomyces lilacinus 淡紫色擬青霉Paecilomyces lilacinus凍干安全等級:1模式菌株:no綜合馬鈴薯培養(yǎng)基:20%馬鈴薯汁)1L ,葡萄糖20g, KH2PO4 3g ,MgSO4.7H2O 1.5g, Vitanib B1 (硫胺素) 微量,瓊脂)15g, pH 6生長條件:25-28℃,好氧 純度:98%
Scopulariopsis│breuicaulis 光孢短柄帚霉Scopulariopsis│breuicaulis凍干物安全等級:1模式菌株:no電工電子產(chǎn)品試用菌CM0017生長條件:28℃存儲條件:真空冷凍干燥法;定期移植法 純度:98%
Gloeosporium│musarum 香蕉炭疽盤長孢菌Gloeosporium│musarum凍干物安全等級:1模式菌株:no教學(xué)、科研CM0017生長條件:26℃存儲條件:真空冷凍干燥法;定期移植法 純度:97%
Schwanniomyces│occidentalis 許旺酵母Schwanniomyces│occidentalis凍干物安全等級:1模式菌株:noCM0181生長條件:24℃存儲條件:-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:97%
ACH人乙酰膽堿ELISA試劑盒實驗原理B群鏈球菌顯色培養(yǎng)基丹參素鈉2-乙基-4-甲基噻唑MDM2 (urine double minute 2) 雙微體2癌基因抗原
ESBL顯色培養(yǎng)基冬凌草甲素2-異基-4-甲基噻唑MDR1(multidrug resistance 1) 多藥耐藥蛋白抗原
KPC顯色培養(yǎng)基輔酶Q102-異基-4-甲基噻唑MEF2(myocyte enhancer-binding factor 2) 肌增強因子2抗原
CTX-M顯色培養(yǎng)基防己(漢防己甲素)2,6-二氨基-4-嘧Mfn1 (Mitofusin1) 線粒體融合蛋白1
Agar 瓊脂防己諾林(漢防已乙素)2,6-二氨基-4-嘧MT(metallothionein) 金屬硫蛋白抗原
Agar 瓊脂鬼臼素3-氨基-1-MGr1-Ag/37LRP(P37-kDa laminin receptor precursor) 層粘連蛋白受體1抗體
L-Arginine L-精氨葛根素3-氨基-1-MGr1-Ag/37LRP(P37-kDa laminin receptor precursor)(CT) 層粘連蛋白受體1抗原(C端)
L-Aspartic acid L-天門冬氨黃芪總皂苷LicofeloneMK(Midkine) 中期因子/肝素結(jié)合生長因子抗原
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