細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：肺動脈外膜成纖維細(xì)胞    

產(chǎn)品規(guī)格：5×105

貨號：FS-01X9761

產(chǎn)品類型：原代細(xì)胞

單位：T25/瓶

提供細(xì)胞鑒定：提供免疫熒光鑒定報(bào)告

保存培養(yǎng)溫度（℃）：37

運(yùn)輸溫度（℃）：常溫

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

注意事項(xiàng)：

人1,5-脫水葡萄糖/1,5-脫水山梨(1,5-AG)ELISA試劑盒英文名稱：Human 1,5-anhydroglucitol,1,5-AG ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人N端中段骨鈣(N-MID-OT)ELISA試劑盒英文名稱：Human N-MID Osteocalcin,N-MID-OT ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6(LRP-6)ELISA試劑盒英文名稱：Human low-density lipoprotein-receptor-related protein,LRP-6 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人極低密度脂蛋白受體(VLDLR)ELISA試劑盒英文名稱：Human very low density lipoprotein receptor,VLDLR ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人低密度脂蛋白受體(LDLR)ELISA試劑盒英文名稱：Human very low density lipoprotein receptor,VLDLR ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人過氧化物體增殖因子活化受體γ( PPAR-γ)ELISA試劑盒英文名稱：Human Peroxisome Proliferator-activated receptor γ,PPAR-γ ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人神經(jīng)膠質(zhì)纖維性蛋白(GFAP)ELISA試劑盒英文名稱：Human glial fibrillary acidic protein,GFAP ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人15脂加氧(15-LO/LOX)ELISA試劑盒英文名稱：Human 15-lipoxygenase,15-LO/LOX ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人膽固酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)ELISA試劑盒英文名稱：Human glial fibrillary acidic protein,GFAP ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人糖原磷化同工II(GP-II)ELISA試劑盒英文名稱：Human Glycogen phosphorylase II,GP-II ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人糖原磷化同工MM(GP-MM)ELISA試劑盒英文名稱：Human Glycogen phosphorylase MM,GP-MM ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人糖原磷化同工BB(GP-BB)ELISA試劑盒英文名稱：Human Glycogen phosphorylase BB,GP-BB ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人吡啶交聯(lián)物(PY)ELISA試劑盒英文名稱：Human pyridinium crosslink/PyriLinks,PY ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人骨橋(OPN)ELISA試劑盒英文名稱：Human Osteopontin,OPN ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人γ基丁(GABA)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Gamma-aminobutyric acid,GABA ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人P物質(zhì)受體(SP-R)ELISA試劑盒英文名稱：Human substance P receptor,SP-R ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人脂蛋白磷脂A2(Lp-PL-A2)ELISA試劑盒英文名稱：Human lipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PL-A2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人內(nèi)皮脂肪(EL)ELISA試劑盒英文名稱：Human Endothelial lipase,EL ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
肺動脈外膜成纖維細(xì)胞AQP0/MIP26  水通道蛋白0抗體規(guī)格: 0.1ml

TYK2  非受體酪蛋白激2抗體規(guī)格: 0.1ml

HRH1  組受體H1抗體規(guī)格: 0.1ml

HRH2  組受體H2抗體規(guī)格: 0.1ml

phospho-HRH1(Ser398)  磷化組受體H1抗體規(guī)格: 0.1ml

HOXA11  同源盒蛋白HOXA11抗體規(guī)格: 0.1ml

HOXA9  同源盒蛋白HOXA9抗體規(guī)格: 0.1ml

HOXB5  同源盒蛋白HOXB5抗體規(guī)格: 0.1ml
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。