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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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線粒體超氧化物染色試劑盒-M13

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產(chǎn)品型號(hào)

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所  在  地上海市

更新時(shí)間：2022-05-11 16:13:52瀏覽次數(shù)：172次

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貨號(hào) FS-X9860
產(chǎn)品介紹:
M13線粒體超氧化物染色/檢測(cè)試劑盒是利用M系列探針進(jìn)行線粒體超氧化物特異性染色的試劑盒。本試劑盒中的M13線粒體超氧化物染色探針為紅色熒光標(biāo)記的線粒體探針，具有510/580nm 的大激發(fā)/發(fā)射波長。
M13線粒體超氧化物染色探針是一種細(xì)胞滲透型的對(duì)活細(xì)胞中的線粒體體進(jìn)行選擇性染色的一類新型熒光染料，該探針可以選擇性標(biāo)記線粒體，包含標(biāo)記線粒體的弱巰基反應(yīng)性的氯甲基官能團(tuán)。只需簡單孵育

產(chǎn)品介紹:

M13線粒體超氧化物染色/檢測(cè)試劑盒是利用M系列探針進(jìn)行線粒體超氧化物特異性染色的試劑盒。本試劑盒中的M13線粒體超氧化物染色探針為紅色熒光標(biāo)記的線粒體探針，具有510/580nm 的大激發(fā)/發(fā)射波長。

M13線粒體超氧化物染色探針是一種細(xì)胞滲透型的對(duì)活細(xì)胞中的線粒體體進(jìn)行選擇性染色的一類新型熒光染料，該探針可以選擇性標(biāo)記線粒體，包含標(biāo)記線粒體的弱巰基反應(yīng)性的氯甲基官能團(tuán)。只需簡單孵育細(xì)胞，即可穿過細(xì)胞膜并直接聚集在活性線粒體上。一旦進(jìn)入線粒體后，快速被超氧化物氧化，并產(chǎn)生紅色熒光。M13線粒體超氧化物染色探針只可被超氧化物氧化，而不被其他活性氧類(ROS)和活性氮類(RNS)氧化。氧化產(chǎn)物結(jié)合核酸后，可產(chǎn)生大量紅色熒光。

儲(chǔ)存條件：染料-20℃避光保存；避免反復(fù)凍融；稀釋液2-8℃保存。

按每個(gè)樣用200μl染料計(jì)，試劑盒可以做30-150個(gè)樣或60-300個(gè)樣；

按每個(gè)樣用100μl染料計(jì)，試劑盒可以做60-300個(gè)樣或120-600個(gè)樣。

有效期：六個(gè)月。

中文名稱：線粒體超氧化物染色試劑盒-M13

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：30T|50T

貨號(hào)：FS-X9860

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

N-乙酰基葡萄糖（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： NilotinibC-藻藍(lán)/藻藍(lán)蛋白/藻青蛋白抗體包裝25g

Nateglinide（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Spiramycin色P450 1A1抗體包裝5g

Nifedipine（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Spiramycin絲/蘇蛋白質(zhì)激II α抗體包裝1mg

Norepinephrine Bitartrate(標(biāo)...英文名： Spironolactone2號(hào)染色體開放閱讀框66抗體包裝5mg

Norethindrone(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： SpironolactoneCULLIN抗體包裝25mg

O,P-滴滴滴(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Carbamazepine小牛胸腺DNA抗體包裝5mg

P-基異酯（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Carbamazepine1號(hào)染色體開放閱讀框226抗體包裝25g

Phenformin hydrochloride(標(biāo)準(zhǔn)...英文名： Carboplatin組織蛋白L抗體包裝5g

ylephrine hydrochloride...英文名： Carboplatin絲/蘇蛋白激II β抗體(casein kinase IIβ)包裝100g

Pioglitazone HCl（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Vincristine Sulfate角蛋白18抗體包裝25g

Prednisolone acetate(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Vincristine Sulfate轉(zhuǎn)化生長因子β1結(jié)合蛋白抗體包裝10g

Prednisolone（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Pazopanib22號(hào)染色體開放閱讀框45抗體包裝50g

Prednisone Acetate（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Felodipine22號(hào)染色體開放閱讀框32抗體包裝100g

Prednisone(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： FelodipineCD5L抗體包裝25g

Pregnenolone Acetate(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： 6-TG/ThioguanineCD6抗體包裝500g

靈芝菌Ganoderma│lucidum (Curtis) P. Karst. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品血紅蛋白H試劑盒雪膽 ;Curcurbitacin

: ATCC51331資源名稱: 嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌 質(zhì)量規(guī)格：>98%血紅蛋白C試劑盒纈草三酯;Valtrate

乳乳球菌Lactococcus│lactis 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,USP/BP血紅蛋白試劑盒香荊芥酚;5-Isopropyl-2-m
線粒體超氧化物染色試劑盒-M13根瘤 2-氨基-5-氟苯并噻唑抗父體性抗體

土壤桿屬 2H-吡啶并[3,2-b]-1,4-雜氧-3(4H)-酮漢坦病IgM抗體

加拿大帚霉 2,5-二溴肺衣原體IGM

球毛殼 2H-吡啶并[3,2-b]-1,4-雜氧-3(4H)-酮黑色

茶樹菇 1,3-二氫-5,6-二甲基-2H-苯并咪唑-2-酮脫氧核糖核Ⅰ

潰瘍棒狀桿 2,5-二溴SCAMP3

羅磷傘 N-基芐解偶聯(lián)蛋白 1

赭綠青霉 1-(3-基)-4-甲基哌h(yuǎn)er2-ecd

癤葡萄座腔 5-并[C][1,2,5]惡二唑分泌型卷曲相關(guān)蛋白3

馬拉交替紅色桿 5-并[C][1,2,5]惡二唑鳥

黃綠木霉 4--2-氟肉桂肽基精脫亞2

德氏乳桿保加利亞亞種 環(huán)己碳鹽肽基精脫亞4

喜溫愛達(dá)荷犁頭霉 4-氨基吡唑并[3,4-d]嘧啶結(jié)核桿抗體

異常威克漢姆酵母 3-甲基噻吩-2-羧神經(jīng)絲蛋白L

熱葡糖地芽孢桿 對(duì)己基溴苯白介4受體

 


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