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貨號 | FS-X9920 |
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中文名稱:Dacie氏液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100ml
貨號:FS-X9920
產(chǎn)品介紹:
用途: 用于紅細胞計數(shù) 注意事項: 由檸檬酸鈉,等組成。 儲存條件:室溫,12個月 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
斜頂菌BMP內(nèi)皮調(diào)節(jié)蛋白抗體Human HAL 小鼠低密度脂蛋白(LDL)免疫試劑盒
相思根瘤菌肝病NS5A反轉(zhuǎn)錄蛋白8抗體Human HAPLN4 小鼠的牛血清白蛋白殘留檢測免疫試劑盒
聚貪氏菌骨形態(tài)發(fā)生蛋白1/膠原C蛋白肽鏈內(nèi)切抗體Human hamartin 小鼠蛋白聚糖4(PRG4)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌骨形態(tài)發(fā)生蛋白9抗體Human HAO1 小鼠蛋白激B(PKB)免疫試劑盒
Nocardioides微管蛋白β輔助因子D抗體Human HAP1 小鼠膽囊收縮/腸促胰肽(CCK)免疫試劑盒
非脫羧勒克菌鈣粘蛋白相關(guān)蛋白受體BTR1抗體Human Harmonin 小鼠乙酰轉(zhuǎn)移(ChAT)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌有絲分裂蛋白BUB3抗體Human HARS2 小鼠膽固酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)免疫試劑盒
球孢白僵菌p60TRP蛋白抗體Human HAT1 小鼠膽固(CH)免疫試劑盒
赭色擲孢酵母博萊霉水解抗體Human GYG1 小鼠單克抗體亞型鑒定免疫試劑盒
釀酒酵母短蛋白聚糖抗體Human GUCY1B3 小鼠單核趨化蛋白5(MCP-5)免疫試劑盒
美澳型核果褐腐病菌BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體Human GTSE1 小鼠單核趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)免疫試劑盒
耶納農(nóng)球菌巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白12抗體Human GTPBP5 小鼠單核趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌堿性亮拉鏈蛋白BZW1抗體Human GUCY2D 小鼠單核趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)免疫試劑盒
Bacillus tequilensis 骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體1B抗體Human GUCY1A3 小鼠單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)免疫試劑盒
*正紅菇Bcl2相互作用蛋白1抗體(轉(zhuǎn)化相關(guān)基因8蛋白)Human GUCY2F 小鼠大內(nèi)皮(Big ET)免疫試劑盒
豬丹絲菌骨形態(tài)發(fā)生蛋白5抗體Human GUF1 小鼠大動脈平滑肌肌動蛋白α2(Acta2/Actsa/Actvs)免疫試劑盒
蘇云金芽孢桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRβ-轉(zhuǎn)導重復序列包含蛋白試劑盒雙草鹽
優(yōu)雅食烷菌Alcanivorax│venustensis 質(zhì)量規(guī)格:BRβ抑制蛋白2試劑盒甘草堿
擬諾卡氏菌屬菌種Nocardiopsis│sp. 質(zhì)量規(guī)格:商品級β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白試劑盒沙蟾精
Dacie氏液嗜熱鏈球 乙?;阴Ρ酵N異體移植炎癥因子1
Ramlibacter tataouinensis 4'--4-氨基二苯轉(zhuǎn)化生長因子β受體1
產(chǎn)氮假單胞(可定) 單氟磷鈉聚(ADP核糖)聚合1
莫哈韋芽孢桿 基磺酰乙型肝炎病表面IgG抗體
變綠肉座 [1,3-雙(2,4,6-三基)-2-咪唑烷亞基][2-[[(4-基)亞氨基]甲基]-4白介28D
少孢酵母 2--4-氟苯白喉IgG抗體
盤多毛孢 萘酯電壓門控通道抗體
短小克銀漢霉 -5-甲甲酯7-脫氫膽固
釀酒酵母 2-(1-哌基)瘤病16型E6蛋白
雞傷門氏 2-羥基苯并噻唑
黑曲霉 DL-2-(3-苯氧基)/調(diào)果血紅氧合1
球孢白僵 O-去甲游離型肝炎病核心抗原
釀酒酵母 2--1,4-萘醌白介8受體α
微桿屬 丁-1,1-二甲基-2-苯乙酯白介8受體β
產(chǎn)堿假單胞 4-溴-1H-吡咯-2-羧甲酯膜鐵轉(zhuǎn)運蛋白
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