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當前位置：上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學試劑>>細胞組織染色>> 紅色標本保色液Ⅰ
| 貨號 | FS-X10208 |
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中文名稱：紅色標本保色液Ⅰ
英文名稱：
產(chǎn)品規(guī)格：500ml
貨號：FS-X10208
產(chǎn)品介紹:
注意事項： 由、甘油等組成。在制作保色浸制標本后，瓶口要用石蠟或者凡士林密封嚴實，并避免陽光直射。 儲存條件：室溫，12個月 |
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
細枝孢甘脫羧P蛋白抗體Human THRSP 大鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)免疫試劑盒
耐輻射奇球菌核孔蛋白GLE1抗體Human SIRT7(NAD-dependent deacetylase sirtuin-7) 大鼠繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激(AMH)免疫試劑盒
交替紅色桿菌屬腎小球上皮蛋白1抗體Human THTPA 大鼠免疫球蛋白M(IgM)免疫試劑盒
柱孢菌屬轉(zhuǎn)錄因子Gli4/鋅指蛋白gli4抗體Human THUMPD3 大鼠免疫球蛋白G(IgG)免疫試劑盒
小棱盤菌麥角蛋白抗體Human TICAM2 大鼠免疫球蛋白E(IgE)免疫試劑盒
多主葡萄殼菌膠質(zhì)瘤發(fā)病相關(guān)蛋白1抗體Human TIGD5 大鼠免疫球蛋白A(IgA)免疫試劑盒
溶淀粉類芽孢桿菌糖基轉(zhuǎn)移25結(jié)構(gòu)域1/前膠原半乳糖基轉(zhuǎn)移1抗體Human THUMPD1 大鼠絡(luò)(TYR)免疫試劑盒
油菜菌核病菌谷酰酰水解抗體Human TIGD1 大鼠卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)免疫試劑盒
乳白耙菌糖基轉(zhuǎn)移25結(jié)構(gòu)域2/前膠原半乳糖基轉(zhuǎn)移2抗體Human TIMELESS(Protein timeless homolog) 大鼠卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)免疫試劑盒
大腸埃希菌糖基轉(zhuǎn)移28家族1抗體Human THOC7 大鼠卵泡抑(FS)免疫試劑盒
東方伊薩酵母糖基轉(zhuǎn)移6結(jié)構(gòu)1抗體Human TIMM10 大鼠膽固?；D(zhuǎn)移(LCAT)免疫試劑盒
貝酵母膠質(zhì)瘤抑癌候選基因2抗體Human THOC6 大鼠硫氧還蛋白還原(TrxR)免疫試劑盒
黑曲霉磷化糖皮質(zhì)激受體抗體Human THRAP3 大鼠硫氧化還原蛋白(Trx)免疫試劑盒
香菇葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白6抗體Human Thrombospondin 3 大鼠硫乙酰肝蛋白多糖2(HSPG2)免疫試劑盒
明尼蘇達被毛孢糖皮質(zhì)激受體β抗體Human SIRT7(NAD-dependent deacetylase sirtuin-7) 大鼠硫類肝(HS)免疫試劑盒
武夷小單孢菌胰島葡萄糖6磷2抗體Human TINP1 大鼠流行性乙型腦炎(JE)抗體(IgG)免疫試劑盒
芽孢桿菌Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,≥99.0% (GC)芳樟
施氏微桿菌Microbacterium│schleiferi 質(zhì)量規(guī)格：柱層析用蓮心堿
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：柱層析用，200-400目蓮心堿高鹽
紅色標本保色液Ⅰ枯草芽胞桿 2-氨基十六烷環(huán)磷腺
多毛孢 3,5-二溴三氟甲苯磷脂
豇豆慢生根瘤 2,3-二苯甲酰干擾誘導蛋白1
香菇(L087) 3-溴三氟甲苯白三烯
Marisediminicola 2-溴-5-氟三氟甲苯顆粒蛋白前體
蘇云金芽孢桿松蠋亞種 3-溴-2-白介38
產(chǎn)克雷伯氏 溴乙酯巨噬炎性蛋白
玉蜀黍赤霉 2-甲基巰基-4-氨基嘧啶-5-甲乙酯甘油一酯
螺卷毛殼（只確定屬） 3-基-1,2-抗甲狀腺過氧化物抗體
松口蘑 芴甲氧羰基-L-高精膽
谷棒桿 2-氨基-1,3,4-噻二唑短鏈脂肪
秦氏蜜環(huán) 2-溴-1,4-二氟苯Klotho蛋白
枯草芽孢桿 4-氨基苯甲脒鹽鹽3β羥基類固脫氫
黑曲霉 2'-氟乙酰苯17β羥基類固脫氫
栗酒裂殖酵母 磷氫二P450側(cè)鏈裂解
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