高爾基體G01綠色熒光染色試劑盒-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9862

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱(chēng)：高爾基體G01綠色熒光染色試劑盒

英文名稱(chēng)：

產(chǎn)品規(guī)格：30T

貨號(hào)：FS-X9862

產(chǎn)品介紹:

G01高爾基體染色試劑盒是利用G系列探針進(jìn)行細(xì)胞高爾基體特異性染色的試劑盒。本試劑盒中的G01高爾基體染色探針為綠色熒光標(biāo)記的細(xì)胞膜探針，具有465/535nm的大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)。

G系列探針是對(duì)活細(xì)胞的高爾基體進(jìn)行選擇性染色的一類(lèi)熒光染料，該系列探針可以選擇性標(biāo)記高爾基體，當(dāng)與高爾基體結(jié)合后其熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng)，被激發(fā)后可以發(fā)出綠色的熒光，具有很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。

以96孔板每孔200μl染色液計(jì)，本試劑盒小包裝可以染色50個(gè)樣本。

儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存。

有效期：6個(gè)月。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

Vildagliptin(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Ifosfamide促腎上腺皮質(zhì)激釋放因子抗體包裝1g

α-甘（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Ifosfamide促腎上腺皮質(zhì)激釋放因子抗體包裝5g

α-對(duì)羥基甘（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Pramipexole 2HCL monohydrate5號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框54抗體包裝1g

α-代-β-英文名： Pramipexole 2HCL monohydrateCD93抗體包裝5g

α-基吡啶（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Vinblastine Sulfate嗜粒趨化蛋白CCL6抗體包裝5g

α-三聯(lián)噻吩（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Vinblastine Sulfate6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框81抗體包裝1g

α-戊二(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Vinblastine Sulfate巨噬炎性蛋白1β抗體包裝1g

β-Estradiol（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： TemozolomideNK抑制性受體2DL4抗體包裝5g

β-(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： TemozolomideNK抑制性受體2DS4抗體包裝1g

β-環(huán)糊精（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： AminoglutethimideNK抑制性受體3DL1抗體包裝5g

阿達(dá)唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Aminoglutethimide7號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框46抗體包裝100g

帕林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Flutamide蛋白磷PP2A癌抑制蛋白抗體包裝25g

阿德福韋(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Flutamide巨噬甘露糖受體CD206抗體包裝1g

阿德福韋/阿韋酯（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Cyclophosphamide淋巴衍生C-型凝集抗體包裝5g

（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Cyclophosphamide5號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框60抗體包裝1g

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品血管生成抑制因子試劑盒新對(duì)葉百部堿;Neotuberostem

慢生大豆根瘤菌Bradyrhizobium│japonicum 質(zhì)量規(guī)格：含量>98.5%,BR血管生成樣蛋白4試劑盒小蕓木;Micromelin

ATCC17588=IFO14165=IAM12668資源名稱(chēng): 施氏假單胞菌質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR血管生成樣蛋白3試劑盒薟精;Darutigenol
高爾基體G01綠色熒光染色試劑盒五通橋毛霉順-4-環(huán)己烯-1,2-二羧風(fēng)疹病IgG抗體

球型接合酵母 2-(1-咪唑基)乙流行性腮腺炎病IgG抗體

地衣芽孢桿 6-溴己酰神經(jīng)絲中鏈蛋白M

釀酒酵母 2,6-二氟苯Ⅷ相關(guān)抗原

枯草芽孢桿 2,3,4-三氟苯磷化tau

葡萄擬莖點(diǎn)霉異硫異酯腮腺炎病IgM抗體

灰葡萄孢(測(cè)序正確） (1R,2R,3S,5R)-(-)-2,3-蒎烷二水痘帶狀皰疹病IgM抗體

根瘤 5-丁基噁唑-2,RNA結(jié)合基元蛋白8

鹽地喜鹽芽孢桿 D(-)-阿糖鈣CXC趨化因子配體1

根霉 N-乙烯基己內(nèi)酰輪狀病

*豬苓 2',4'-二苯乙酮甲酰甲硫

粘質(zhì)沙雷氏 3,5-二甲基-4-羥基苯甲抗小鼠抗體

丁香鏈霉 1-(對(duì)甲苯磺酰)咪唑多配體蛋白聚糖1

蘋(píng)果鏈格孢硫代甲肼核因子κB受體激活因子配體

盤(pán)長(zhǎng)孢狀盤(pán)孢 2-羥基異煙單純皰疹病Ⅰ+Ⅱ型IgM抗體
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)