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貨號	FS-X9746

中文名稱：人淋巴細(xì)胞分離液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：200ml

貨號：FS-X9746

產(chǎn)品介紹:

人淋巴細(xì)胞分離液采用優(yōu)質(zhì)原料科學(xué)配方配制而成。適用于從血液及組織勻漿中分離所需細(xì)胞。本品為無菌溶液。

儲存條件：室溫(18-25℃)避光保存。

開封后 2-8℃保存。

有效期：兩年。

使用方法：

由于各離心機(jī)的性能差異以及實驗室的溫度不同，佳分離條件(離心轉(zhuǎn)速、離心時間等)請根據(jù)實際摸索。

1．取新鮮抗凝血 1ml，與1ml Hank’s液混勻。

2．將以上液體小心加于 1ml的細(xì)胞分離液的液面上。

3．以 1500RPM離心15分鐘。

4．此時離心管中由上至下細(xì)胞分四層。第一層：血漿或組織勻漿液層。第二層：環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層。第三層：透明分離液層。第四層：紅細(xì)胞層

● 此紅細(xì)胞層，表面有懸起的部分白細(xì)胞層。收集界面上的細(xì)胞，放入含 4-5毫升Hank’s 液的試管中，充分混勻后，以1500-2000RPM離心10分鐘。收集第二層細(xì)胞(淋巴細(xì)胞)沉淀經(jīng)2次洗滌收集細(xì)胞。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

白細(xì)胞介16(IL-16)英文名：IL-16 B淋巴成熟因子抗體包裝5g

白細(xì)胞介13(IL-13)英文名：IL-13 促凋亡Bik蛋白抗體包裝1g

白細(xì)胞介12(IL-12/P70)英文名：IL-12/P70 癌抑癌蛋白抗體包裝25g

白細(xì)胞介12(IL-12/P40)英文名：IL-12/P40 癌易感基因環(huán)狀結(jié)構(gòu)域蛋白抗體包裝5g

白細(xì)胞介10(IL-10)英文名：IL-10 癌相關(guān)抗原BRCAA1抗體包裝25g

白細(xì)胞分化抗原配體40(CD40/TNFRSF5)英文名：CD40/TNFRSF5 腦組織表達(dá)X連鎖蛋白1抗體包裝5g

白細(xì)胞分化抗原30配體(CD30L)英文名：CD30L B淋巴連接蛋白抗體包裝25g

白介21(IL-21)英文名：IL-21 磷化T淋巴連接蛋白抗體包裝5g

白介1受體拮抗劑(IL-1RA)英文名：IL-1RA Bcr抗體包裝1g

白介1β(IL-1B)英文名：IL-1B 磷化癌易感基因1抗體包裝5g

白介17(IL-17)英文名：IL-17 磷化Bcl-2抗體包裝5mg

白介12(IL-12/P70)英文名：IL-12/P70 磷化Bcl-2抗體包裝25g

白介12(IL-12/P40)英文名：IL-12/P40 磷化T淋巴受體抗體包裝5g

L選擇(SELL)英文名：SELL 骨架銜接蛋白BIN3抗體包裝1g

E-鈣粘附分子(E-Cadherin/CDH1/CD324)英文名：E-Cadherin/CDH1/CD324 雙向染色體分裂蛋白1抗體包裝250mg

性磷樣蛋白2抗體干擾α17(IFNα17)LDN193189 是一種選擇性的 BMP I 型受體抑制劑，抑制 ALK2 和 ALK3 的 IC50 分別為 5 nM 和 30 nM。對 ALK4，ALK
人淋巴細(xì)胞分離液釀酒酵母單叔丁基琥珀酯皮質(zhì)

桔橙鏈霉 5-硝基噻酚-2-甲皮質(zhì)結(jié)合球蛋白

聚生殼 Fomc-2-氨基皮質(zhì)酮;腎上腺酮

Maribius pelagius 2-(3-基)-1,3-二噁戊環(huán)皮質(zhì)抑

費氏桿費氏亞種 2-(1-環(huán)己烯基)環(huán)己酮脾臟酪激

小孢毛霉 4,8-二辛氧基-苯并[1,2-b:3,4-b]二噻吩-2,6-二嘌呤能受體P2X7

黃微綠鏈霉 4-氟-3-硝基溴芐破骨分化因子

黑曲霉 5-溴-1-甲基-1,2,4-三氮唑破傷風(fēng)抗體

谷棒桿Ⅰ型 1-十六烷磺鈉脯4羥化a1

貝倫格葡萄座腔 1-N-BOC-4-(4-磺酰氧甲基)脯羥化

枯草芽孢桿 2,3-二甲甲酯脯肽

大腸埃希美他沙酮葡萄球蛋白A

米根霉 4-苯甲?；∑咸烟?6-磷

鮑魚菇 O-芐基-L-酪葡萄糖-6-磷脫氫

畢赤酵母 4-苯甲?；〖柞テ咸烟羌?/span>

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