煌焦油藍(lán)染色液-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9918

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：煌焦油藍(lán)染色液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

貨號：FS-X9918

產(chǎn)品介紹:

用途：

煌焦油藍(lán)染色液，主要用于網(wǎng)織紅細(xì)胞活體染色

注意事項：

背景清楚，顏色鮮亮

儲存條件：室溫，避光，12個月

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

高加索鏈霉菌β-乳球蛋白抗體Human HBA1 小鼠鈣結(jié)合蛋白(CR)免疫試劑盒

Salinicoccus alkaliphilusβ-乳球蛋白抗體Human HERPUD2 小鼠鈣非依賴型磷脂A2(iPLA2)免疫試劑盒

Pilidium concavum緩激肽B2受體抗體Human HEATR4 小鼠鈣調(diào)(CAM)免疫試劑盒

金頂側(cè)耳(榆黃蘑)丁酰酯抗體(N端)Human HES5 小鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)免疫試劑盒

褐球固氮菌丁酰酯抗體(C端)Human HESX1 小鼠分泌型磷脂A2(sPLA2)免疫試劑盒

釀酒酵母BLAME抗體Human HEBP2 小鼠肺炎支原體(MP)抗體(IgG)免疫試劑盒

竹喙球菌巴曲霉單克抗體Human HEBP1 小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)免疫試劑盒

釀酒酵母蛇巴曲抗體Human HECTD1 小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C(SP-C)免疫試劑盒

粉肉色杯傘溴脫氧尿抗體Human HECTD2 小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B(SP-B)免疫試劑盒

越南芽孢桿菌腫瘤/抗原2.2抗體Human HECTD3 小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)免疫試劑盒

腸球菌屬腫瘤/抗原2.3抗體Human HELB 小鼠肺表面活性蛋白D(SP-D)免疫試劑盒

互生枝頂孢腫瘤/抗原2.4抗體Human HDAC5 小鼠肥大類(MCT)免疫試劑盒

解鳥拉烏爾菌腦鈉/利鈉肽抗體Human HDAC4(Histone deacetylase 4) 小鼠肥大/干生長因子受體(試劑盒/Sl/CD117)免疫試劑盒

香菇B Raf抗體Human HDAC6 小鼠芳香免疫試劑盒

腐皮鐮孢菌癌易感基因1抗體Human HAUS3 小鼠二酰基甘油(DAG/DG)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌癌易感基因2抗體Human HAX1 小鼠二肽基肽Ⅳ(DPPⅣ)免疫試劑盒

圣格奧爾根菌Georgenia│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>97%,BRγ干擾受體試劑盒蘇木

普拉霍瓦富鹽菌Haloferax│prahovense 質(zhì)量規(guī)格：>97%，BRγ干擾試劑盒商陸皂元

匍枝根霉Rhizopus│stolonifer 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRγ干擾試劑盒R-三七皂R2
煌焦油藍(lán)染色液豬丹絲 3-苯酮狀瘤病16型

卵孢木霉異丁肉桂酯狀瘤病18型

蠟狀芽孢桿丁苯乙酯鐵過氧化物岐化

聚生殼 2-氨基嘧啶-5-前血小板堿性蛋白

伊平屋橋大洋芽孢桿 3-叔丁基己二泛蛋白連接E3成分N-識別蛋白1

頂青霉鄰甲基肉桂肝生長因子受體

耐久腸球 4'-溴苯酮拓?fù)洚悩?gòu)Ⅱ

豇豆慢生根瘤丁芐酯抗新喋呤抗體

硫磺 2-甲基-3-吡咯甲乙酯硫角質(zhì)

根瘤異丁苯甲酯親核α2

Leminorella richardii 2-溴-4-DNAⅠ樣蛋白3

硝孢鏈霉 4-甲砜基苯乙酮Sorbin和含SH3結(jié)構(gòu)域的蛋白2

色串孢屬高銅(II)六水合物增殖誘導(dǎo)配體

噬尼古丁節(jié)桿水楊酰肼肽抑制劑16

直立枝孢左乙抑癌基因Beclin1
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)