巴氏染色液(EA65)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9914

中文名稱：巴氏染色液(EA65)

英文名稱：Papanicolaou EA65

產(chǎn)品規(guī)格：4×100ml|4×250ml|4×500ml

貨號：FS-X9914

產(chǎn)品介紹:

用途：

細胞學(xué)樣本常規(guī)染色，尤其適用于胸、腹水、痰液等非婦科標本的染色。

注意事項：

巴氏染色液是用蘇木素、橙黃、磷鎢酸、亮綠等配制而成，用于處理分泌物等細胞脫落標本，細胞核呈藍色或黑色，角化鱗狀細胞胞漿呈粉紅或橘紅色。

儲存條件：室溫，12個月

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

莓形炭團菌ATP結(jié)合蛋白家族5抗體Human HOPX(Homeodomain-only protein) 小鼠黑色抗體(MC Ab)免疫試劑盒

青枯假單胞菌N-甲基DNA糖基化Human HMG20A 小鼠黑色瘤免疫試劑盒

禾谷絲核菌AU5 tag標簽抗體Human HNRNPH3 小鼠核轉(zhuǎn)錄因子kBP65(NFkBP65)免疫試劑盒

黑輪層碳殼鈣離子ATP通道蛋白抗體Human HMG20B 小鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)免疫試劑盒

豬水泡病病果桃α-L-阿拉伯呋喃糖抗體Human HNRNPUL2 小鼠核因子κB(NF-κB)免疫試劑盒

Pontibacter脂肪炎癥因子Apelin抗體Human HMHA1 小鼠核因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)免疫試劑盒

銅綠假單胞菌氫ATP通道蛋白抗體Human HMP19 小鼠核糖核,核糖核A家族(肝臟,嗜性粒源性神經(jīng))(RNASE2)免疫試劑盒

釀酒酵母ATP5A抗體Human HOMER1 小鼠含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪激2(Tie-2)免疫試劑盒

擬革蓋菌即刻早期基因ARC抗體Human HOMER2 小鼠含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪激1(Tie-1)免疫試劑盒

球孢白僵菌ADP核糖基化因子6抗體Human HN1 小鼠過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物(LPO)免疫試劑盒

靈芝芳香化抗體Human HNF4G 小鼠過氧化物體增殖因子活化受體γ( PPAR-γ)免疫試劑盒

高大毛殼Artemin抗體Human HOMER3 小鼠過氧化物體增殖因子活化受體β(PPAR-β)免疫試劑盒

佛雷德里克斯堡假單胞菌alpha 1腎上腺能受體A抗體Human HNF1B 小鼠過氧化物體增殖物激活受體α(PPAR-α)免疫試劑盒

大腸埃希菌血管緊張Ⅱ-1型受體抗體Human HNRNPA0 小鼠過氧化氫(CAT)免疫試劑盒

金針菇（毛柄金錢菌、冬菇）活化轉(zhuǎn)錄因子3抗體Human HOMER3 小鼠過敏/補體片斷4a(C4a)免疫試劑盒

靈芝血管緊縮樣蛋白1抗體Human HIP1(Huntingtin-interacting protein 1) 小鼠果糖(FRA)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：>98%,植物激級艾柯病IgG試劑盒三七

球孢白僵菌Beauveria│bassiana (Bals.-Criv.) Vuill. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BC艾杜糖硫酯試劑盒-3-O-β-D-槐糖

大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR癌癥促凝試劑盒-4’-葡萄糖
巴氏染色液(EA65)解淀粉芽孢桿 2-硝基-4-甲砜基N-賴甲基轉(zhuǎn)移SMYD2

釀酒酵母甲基四氫鄰苯二甲酐N-賴甲基轉(zhuǎn)移SMYD2

熱帶假絲酵母二苯胍氫鹽FMS樣酪激3配體

Chryseobacterium 1-溴-2--4-氟苯葡萄糖-6-磷脫氫

綠孢環(huán)柄菇 N-苯甲酰替苯精

耐久腸球 3-吡咯啉脂肪合成

擬青霉 N-Boc-3-溴吡咯烷脂肪氧化

潮濕乳菇 3-羥基吡啶肉堿脂?；D(zhuǎn)移

樟疫霉 Boc-L-焦谷甲酯神經(jīng)纖維網(wǎng)蛋白1

黑曲霉 2-氨基-9,9-二甲基芴溶血磷脂酰

禾谷鐮孢* -2-溴乙酯骨成型蛋白15

大豆慢生根瘤 2,6-二甲基吡球蛋白A2

枯草芽孢桿乙蘇合香酯甘油磷-O-?；D(zhuǎn)移

黃桿屬 N-對甲苯磺酰甘能受體P2Y12

青霉 3-甲基-4-硝基吡啶-N-氧化物補體片段4d

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