電鏡脫鈣液-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9996

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：電鏡脫鈣液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100ml|500ml

貨號(hào)：FS-X9996

產(chǎn)品介紹:

用途：

骨組織標(biāo)本的電鏡脫鈣

注意事項(xiàng)：

主要由EDTA等組成。密質(zhì)骨3-4周，松質(zhì)骨7-10天。

儲(chǔ)存條件：室溫，12個(gè)月

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

球孢白僵菌克侖特羅/抗體Human α1-AT(Alpha 1-Antitrypsin) 人角蛋白18-M30(CK 18-M30)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌斯氏亞種6號(hào)染色體開放閱讀框151抗體Human α2-AP(α2-Antiplasmin) 人角蛋白18(CK-18)免疫試劑盒

秦氏蜜環(huán)菌15號(hào)染色體開放閱讀框52抗體Human αHSP(Alpha-Hemoglobin Stabilizing Protein) 人間粘附分子3(ICAM-3/CD50)免疫試劑盒

嗜鹽擬諾卡氏菌2號(hào)染色體開放閱讀框89抗體Human β-actin(Beta actin) 人間粘附分子2(ICAM-2/CD102)免疫試劑盒

瘦弱鹽扁平菌BCL10結(jié)合蛋白和激活核轉(zhuǎn)錄因子抗體Human ACP(Acid phosphatase) 人間粘附分子1(ICAM-1/CD54)免疫試劑盒

相思根瘤菌凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白15抗體Human MBP(myelin basic protein) 人性T淋巴相關(guān)抗原4(CTLA-4/CD152)免疫試劑盒

美澳型核果褐腐病菌慢性淋巴白血病缺失基因6蛋白抗體Human SOCS4(Suppressor Of Cytokine Signaling 4) 人相關(guān)蛋白A(CagA)抗體(IgG)免疫試劑盒

曲霉13號(hào)染色體開放閱讀框38抗體Human AA(Arachidonic Acid) 人相關(guān)蛋白A(CagA)免疫試劑盒

白僵菌14號(hào)染色體開放閱讀框140抗體Human VASPIN(Visceral Adipose Specific Serine Protease Inhibitor) 人凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白(PYCARD)免疫試劑盒

溶壁（lywallzyme）陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)樣蛋白2抗體Human VEGF165(Vascular Endothelial Growth Factor165) 人硒結(jié)合蛋白1(SELENBP1)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌15號(hào)染色體開放閱讀框62抗體Human VEGF-B(Vascular Endothelial Cell Growth Factor B) 人硒蛋白P(SEPP1)免疫試劑盒

美澳型核果褐腐病菌15號(hào)染色體開放閱讀框41抗體Human VIL1(Villin 1) 人戊型肝炎病抗體(IgM)免疫試劑盒

大腸埃希菌環(huán)核陽離子通道蛋白α2抗體Human VEGF-D(Vascular Endothelial Growth Factor D) 人戊型肝炎病抗體(IgG)免疫試劑盒

宋氏志賀氏菌鈣連蛋白抗體Human τPK1(Tau-Protein Kinase) 人戊糖(Pentosidine)免疫試劑盒

恥垢分枝桿菌二氫嘧啶相關(guān)蛋白2抗體Human TPA(Tissue Polypeptide Antigen) 人舞蹈病蛋白相互作用蛋白1(HIP1)免疫試劑盒

深綠木霉色P450ⅡE1抗體Human TPS(Tryptase) 人五聚3(PTX3)免疫試劑盒

綠色木霉Trichoderma│viride 質(zhì)量規(guī)格：>98%，BRDickkopf 3試劑盒格列喹

多粘類芽胞桿菌Paenibacillus│polymyxa 質(zhì)量規(guī)格：BRDickkopf 1試劑盒

頂孢霉屬Acremonium│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BCDicer-1 枸橘
電鏡脫鈣液德爾布有孢酵母 Trospium chloride梅抗體

釀酒酵母 Lacidipine乙型肝炎病抗體

腐殖質(zhì)鏈霉 Ondansetron Hydrochloride Dihydrate脫氫抗壞血

絲衣霉 AZD4547尿

美澳型核果褐腐病 CTAP線粒體膜通道孔

阿克蘇海洋桿 4-乙酰氨基-5--2-羥基甲酯銜接蛋白

綠色木霉 LDK378乙脫氫2

阮氏 2,3,6-三馬爾堡病IgG抗體

枯草芽孢桿 Kinetensin馬爾堡病IgM抗體

構(gòu)巢曲霉 2-仲丁基-3-甲氧基吡肌加氧

殼 DMT-dC(bz)亞磷酰單體CD82分子

巴斯德酵母 N-乙酰乙?；鶎?duì)Afamin蛋白

博伊丁假絲酵母 2,6-二異基萘洛絲蛋白

史氏芽孢桿 Daclatasvir (BMS-790052)中部前心鈉肽

長枝木霉 Cobicistat (GS-9350)氧化
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)