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貨號 | FS-X9998 |
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中文名稱:抗酒石酸酸性磷酸酶染色液
英文名稱:
產品規(guī)格:3×10ml|3×20ml
貨號:FS-X9998
產品介紹:
用途: 細胞和組織的抗酒石酸酸性磷酸酶染色 注意事項: 主要由萘酚、六氮化對品紅、亞等組成,染色后酶活性部位呈紅色。 儲存條件:-20℃,避光,6個月 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
柑橘莖點菌CD13肽N抗體Human TP/TXA2R(Thromboxane Receptor) 人胃蛋白原A(PG-A)免疫試劑盒
變幻青霉巨噬炎性蛋白MIP-3a抗體Human TP(Thymidine Phosphorylase) 人胃蛋白(PG)免疫試劑盒
紅根須腹菌間隙連接蛋白32抗體Human TP5(Thymopentin) 人胃癌抗原MG7-Ag 免疫試劑盒
康寧木霉C端結合蛋白1抗體Human Total P53(Tumor Protein p53) 人胃癌標志物免疫試劑盒
總狀毛霉高分子量角蛋白抗體Human TNKS1(Tankyrase 1) 人尾肢同源蛋白2(PYGO2/PP7910)免疫試劑盒
蟲草屬22號染色體開放閱讀框39抗體Human TNKS2(Tankyrase 2) 人尾加壓Ⅱ 免疫試劑盒
四川散斑殼周期G抗體Human TNNC2(Troponin C Type 2) 人維生K依賴蛋白Z(PROZ)免疫試劑盒
馬賽菌Crk p38抗體Human TNPO1(Transportin 1) 人維生K1(VK1)免疫試劑盒
白地霉磷化Crk p38抗體Human TMSβ10(Thymosin Beta 10) 人維生H(VH)免疫試劑盒
糙皮側耳核心結合因子α1抗體(成骨特異性轉錄因子)Cbfα1Human TMSβ4(Thymosin Beta 4) 人維生E(VE)免疫試劑盒
釀酒酵母膽囊收縮8抗體Human TCC C5b-9(Terminal Complement Complex C5b-9) 人維生D受體(VD R)免疫試劑盒
白地霉表面趨化因子受體1抗體Human TNK2(Tyrosine Kinase, Non Receptor 2) 人維生D結合蛋白(DBP)免疫試劑盒
洛斯線芽孢桿菌表面趨化因子受體2抗體Human TNKS1(Tankyrase 1) 人維生D3(VD3)免疫試劑盒
停乳鏈球菌表面趨化因子受體3抗體Human TNPO1(Transportin 1) 人維生D2(VD2)免疫試劑盒
Mesorhizobium silamurunense表面趨化因子受體4抗體Human TNKS2(Tankyrase 2) 人維生C(VC)免疫試劑盒
榮州農研所絲桿菌活化半胱蛋白蛋白-3抗體Human TNNC2(Troponin C Type 2) 人維生B6(VB6)免疫試劑盒
AS3.2484資源名稱: 卷枝毛霉 質量規(guī)格:>98%,BRC多肽試劑盒西紅柿堿
稻黃桿菌Flavobacterium│oryzae 質量規(guī)格:BCCXC趨化因子受體7試劑盒非洲防己堿
罕見芽孢桿菌Bacillus│barbaricus 質量規(guī)格:>98%,BRCXC趨化因子受體4試劑盒
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液紫皮蘑 艾沙康挫α-黑
樊氏鹽單胞 5--2-紅富鐵
芽胞桿 Lys-Tyr-Lys acetate salt干擾誘導蛋白35kDa
小弧 2-溴-3-甲氧基吡啶磷化蛋白激C
矮棒曲霉 Octadecyl 4-chlorobenzenesulfonate [Octadecyl p-ch磷化蛋白激C
擬青霉 4-溴-2-甲磷酯C
橙黃硬皮馬勃 乙酰酮二(2-苯基吡啶)銥單氧化A
短柄帚霉 麥芽三糖單氧化B
大腸埃希 Phallacidin from Amanita phalloides成纖維生長因子9
韓國梅奇酵母 N-丁基芐ADP-核糖基轉移
美味側耳 Phallacidin from Amanita phalloides完整的成纖維生長因子23
平菇—CCEF89 2',7'-Difluorofluorescein成纖維生長因子23的C端裂解片段
稻黑孢 6-ROX [6-Carboxy-X-Rhodamine]心房利鈉肽
扣囊復膜孢酵母 Methyl 3,5-diformyl-1-indolizinecarboxylate組蛋白去甲基化
金黃殼囊孢 煙芐酯鞘氨激1
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