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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> β-半乳糖苷酶染色試劑盒(細(xì)胞專用)
貨號(hào) | FS-X10000 |
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產(chǎn)品介紹:
用途: 培養(yǎng)細(xì)胞和組織切片的衰老檢測(cè),又稱X-gal染色液 注意事項(xiàng): 試劑盒主要由β-半乳糖苷酶固定液、X-gal、半乳糖苷酶染色液等組成。以X-Gal為底物,在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會(huì)生成深藍(lán)色產(chǎn)物。 儲(chǔ)存條件:-20℃,避光,12個(gè)月 |
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100T
貨號(hào):FS-X10000
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
冠突曲霉20號(hào)染色體開放閱讀框177抗體Human TALLA-1(T-cell acute lymphoblastic leukemia antigen) 人晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)免疫試劑盒
沙生梭孢殼CD244抗體Human TBX2(T-Box Protein 2) 人外顯肽(extein)免疫試劑盒
葡萄汁有孢漢遜酵母巨噬炎性蛋白1α抗體Human TA(Anti-Teichoic Acid Antibody) 人唾液免疫試劑盒
牛舌菌、肝色牛排菌巨噬炎性蛋白19抗體Human SYK(Spleen Tyrosine Kinase) 人唾液(SA)免疫試劑盒
白地霉色P450 3A4抗體Human TAB(Thyroxine Antibody) 人唾液過氧化物(SP)免疫試劑盒
谷棒桿菌角蛋白6抗體Human SPTAN1(Alpha-Fodrin) 人拓樸異構(gòu)Ⅱ(TopoⅡ)免疫試劑盒
黃桿菌角蛋白7抗體Human SLC16A8(Solute Carrier Family 16, Member 8) 人脫氧皮質(zhì)(DOC)免疫試劑盒
腸炎沙門氏菌磷化角蛋白17抗體Human SELL(L-Selectin) 人脫氧尿三磷(DUTP)免疫試劑盒
栗疫菌卷曲螺旋域蛋白質(zhì)85C抗體Human SM/SPH(Sphingomyelin) 人脫氧核糖核Ⅰ(DNase-Ⅰ)免疫試劑盒
紅色紅曲白介1-β轉(zhuǎn)化樣凋亡蛋白6抗體Human Smad4/MADH4(Mothers Against Decapentaplegic Homolog 4) 人脫氧吡啶/脫氧吡啶啉(DPD)免疫試劑盒
平菇(江都156)白介1-β轉(zhuǎn)化樣凋亡蛋白6抗體Human SEMA7A(Semaphorin 7A) 人脫氫表雄硫酯(DHEA-S)免疫試劑盒
Pseudomonas entomophila L48表面趨化因子受體4抗體Human SEPCR/PROCR(Soluble Endothelial Protein C Receptor) 人脫氫表雄(DHEA)免疫試劑盒
產(chǎn)紫青霉CD19抗體Human sFMC(Soluble Fibrin Monomer Complex) 人脫-γ-羧基凝血原(DCP)免疫試劑盒
植物乳桿菌環(huán)氧合2/前列腺內(nèi)過氧化物合成2抗體Human SERT(Serotonin Transporter) 人褪黑(MT)免疫試劑盒
椿象紅球菌白分化抗原CD2AP抗體Human SIAE(Sialic Acid Acetylesterase) 人突觸泡蛋白抗體(SYP-Ab)免疫試劑盒
沙場鏈霉菌CD3/CD3-ε 抗體Human Anti HCV(Hepatitis C Virus Antibody) 人突觸泡蛋白(SYP)免疫試劑盒
多殺性巴氏桿菌Pasteurella│multocida 質(zhì)量規(guī)格:>98%Corin 覆盆子
圓錐曲霉Aspergillus│conicus 質(zhì)量規(guī)格:>97%,單氧化(MAO)抑制劑COP9 結(jié)構(gòu)光形態(tài)發(fā)生同源物亞基2試劑盒飛蓬酯乙
綠色鏈霉菌Streptomyces│viridis 質(zhì)量規(guī)格:>96.5%,BSCOLL2-1NO2 飛蓬
β-半乳糖苷酶染色試劑盒(細(xì)胞專用)干酪乳桿 3-乙酰-2,4-二甲基-5乙氧羰基吡咯異質(zhì)性胞核核糖核蛋白K
少根根霉東京變種 (+)-1,4-二-O-芐基-D-蘇糖硫軟骨
類阿達(dá)青霉 Nα-苯甲酰-DL-精氨酰-β-萘阿立新B
膠孢 DiOC2(3) [3,3'-Diethyloxacarbocyanine Iodide]晶狀體蛋白αA
田菁根瘤 2-氟-3--5-CHO宿主蛋白
橙黃色擲孢酵母 (±)-BOC-A-膦酰基甘酯,95%鸚鵡衣原體抗體
嗜糖黃桿 二(2-吡啶甲)金克氏錐蟲抗體
皺褶假絲酵母 (S)-5-氧代四-3-芐酯β-羥基丁
托魯斯山鏈霉 2-Dicyclohexylphosphino-2′,4′,6′-triisopropylbiphe血管生成樣蛋白1
鏈卵屬 [2-(二叔丁基磷)二苯基]金谷脫羧2
腸沙門氏腸亞種波那雷恩血清型 1 - (4,4 - 二苯基-3 - 基)- 3 -鹽鹽卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白2
大腸埃希氏桿 2-(4-聯(lián)苯基)-5-苯基-1,3,4-噁二唑角蛋白6B
熒光假單胞 2-氨基-5-溴噻唑-4-甲甲酯磷核糖焦磷?;D(zhuǎn)移
稻平臍蠕孢 單丁基三異辛錫相關(guān)血漿蛋白A
北京擲孢酵母 2--D-苯樁蛋白2
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