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貨號 | FS-X9864 |
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中文名稱:溶酶體染色試劑盒(紅色熒光)-L03
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:500T|1000T
貨號:FS-X9864
產(chǎn)品介紹:
L03溶酶體染色試劑盒是利用L系列探針進(jìn)行溶酶體特異性染色的試劑盒。本試劑盒中的L03溶酶體染色探針為紅色熒光標(biāo)記的溶酶體探針,具有577/590nm的大激發(fā)/發(fā)射波長。 L系列探針是對活細(xì)胞中的溶酶體進(jìn)行選擇性染色的一類熒光染料,該系列探針可以選擇性標(biāo)記溶酶體,只需要納摩爾級(nM)濃度即可有效標(biāo)記活細(xì)胞。 L系列探針可自由穿過細(xì)胞膜,適用于觀察溶酶體內(nèi)部生物合成及相關(guān)發(fā)病機(jī)理。 L系列溶酶體探針具有多種顏色可以選擇,可根據(jù)情況對樣品進(jìn)行多色標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。除了本試劑盒的紅色熒光探針,我公司還可以提供綠色、藍(lán)色、橙色等顏色的染色試劑盒。 儲(chǔ)存條件:染料-20℃避光保存;避免反復(fù)凍融;稀釋液2-8℃保存。 有效期:6個(gè)月 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
阿扎那韋(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Moxifloxacin Hydrochloride7號染色體開放閱讀框25抗體包裝1g
阿扎那韋硫鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Moxifloxacin HydrochlorideCOG1蛋白抗體包裝25g
艾地醌(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Salmeterol xinafoate過敏C3受體/補(bǔ)體C3受體抗體包裝5g
普列特(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: NaproxenCD3抗體包裝1g
安倍生坦(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: NaproxenCP2相關(guān)轉(zhuǎn)錄抑制因子1抗體包裝5g
安乃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Prednisone電壓依賴型N型鈣通道α1B抗體包裝1g
替比林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Prednisone煙堿型乙酰受體A2(神經(jīng)型)抗體包裝5g
蝶啶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Doxycycline monohydrate/Doxycycline baseC型凝集結(jié)構(gòu)域家族1成員A抗體包裝25g
砜(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Zoledronic acid hydrateγ干擾誘導(dǎo)單核因子抗體包裝5g
芐西林/芐青霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Zoledronic acid hydrate血小板因子4抗體包裝1g
芐西林鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Pamidronate Disodium血小板趨化因子7蛋白抗體包裝250mg
丁三(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Pamidronate Disodium干擾誘導(dǎo)T趨化因子抗體包裝5g
芬鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Gentamicin sulfate B-淋巴趨化因子抗體包裝100g
基比林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Gentamicin sulfate 凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體包裝25g
基己(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Cefuroxime Sodium 凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白14抗體包裝5g
黑曲霉Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格:>97.0%,BR血管生長試劑盒α-香附;α-Cyperone
ATCC15173=CCUG407=CIP7715=DSM30026=ICPB4221=IFO15125=JCM5490=LMG1231=NCTC8582=AS1.1800資源名稱: 木糖氧化產(chǎn)堿菌反硝化亞種 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品血管內(nèi)皮抑抗體試劑盒異藥內(nèi)酯;linderalactone
南方鹽單胞菌Halomonas│meridiana 質(zhì)量規(guī)格:含量>99.0%血管內(nèi)皮粘附分子1試劑盒新藤黃;neogambogic aci
溶酶體染色試劑盒(紅色熒光)-L03霍氏腸桿 L-天冬-4-芐酯糖脂抗體
尖孢鐮刀 五吡啶胞裂蛋白9
釀酒酵母 5-溴-2-牛痘病IgM
哈茨木霉 衣康酐唾液睪酮
綠色木霉 4-甲氧基-2-氧代-1,2-二氫-3-基吡啶D-絲
球孢白僵 1,10-二癸烷趨化因子20
金灰青霉 2--5-羥趨化因子28
毛木耳 2,3,4-三羥基苯甲空泡相關(guān)蛋白A抗體
金龜子綠僵 5--2-羥基-3-硝基吡啶腦膜炎奈瑟氏
死亡谷芽孢桿 2',3'-O-異叉肌髓過氧化物
傳染性法氏囊病病 鄰三甲苯卡介苗抗體
慢生根瘤 草鈮(V)酪
堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿 2-乙氧基苯過氧化氫
雞傷門氏 3--2-氟苯β氨基己糖A
嗜果刀孢 4-溴-2-氟類缺陷病
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