當(dāng)前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> Gram-Twort革蘭染色液
貨號 | FS-X10100 |
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培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
中文名稱:Gram-Twort革蘭染色液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:4×100ml
貨號:FS-X10100
產(chǎn)品介紹:
用途: 組織切片的革蘭氏細(xì)菌染色 注意事項: Gram-Twort革蘭染色液采用非經(jīng)典的革蘭染色配方, 用到紅色和綠色染料,使色彩較為豐富,背景干凈,胞核胞質(zhì)對比強(qiáng)烈,細(xì)菌染色特征典型,多用于組織切片的染色。 儲存條件:室溫,避光,12個月 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
Pseudoxanthomonas動力蛋白激活蛋白6抗體Human RERGL (Ras-related and estrogen-regulated growth inhibitor-like protein) 人α-黑色激(α-MSH)免疫試劑盒
絨奧德蘑脫2抗體Human RASSF1 (Ras association domain-containing protein 1) 人αS轉(zhuǎn)移(α-GST)免疫試劑盒
斑點青霉磷化DNA依賴性蛋白激抗體Human RHEBL1 (GTPase RhebL1) 人α干擾(IFN-α)免疫試劑盒
耐寒短桿菌防御α4抗體Human R3HCC1 (R3H and coiled-coil domain-containing protein 1) 人α-輔肌動蛋白4(ACTN-4)免疫試劑盒
圈卷產(chǎn)色鏈霉菌DNA損傷結(jié)合蛋白1抗體Human SPDEF (SAM pointed domain-containing Ets transcription factor) 人α-輔肌動蛋白3(ACTN-3)免疫試劑盒
炭疽健康皮張抗原DNA損傷結(jié)合蛋白2抗體Human RTBDN (Retbindin) 人α-輔肌動蛋白1(ACTN-1)免疫試劑盒
凝結(jié)芽胞桿菌CD299抗體Human PEAK1 (Pseudopodium-enriched atypical kinase 1) 人α-防御4(NP-4)免疫試劑盒
巨大芽孢桿菌C型凝集結(jié)構(gòu)域家族4成員A抗體Human R3HDML (Peptidase inhibitor R3HDML) 人α淀粉(AMY1)免疫試劑盒
雅致放射毛霉C型凝集結(jié)構(gòu)域家族6成員A抗體Human PTK2B (Protein-tyrosine kinase 2-beta) 人α半乳糖基(α-Gal)免疫試劑盒
解淀粉芽孢桿菌B淋巴銜接分子DAPP1抗體Human RABGAP1 (Rab GTPase-activating protein 1) 人α半乳糖(αGAL)免疫試劑盒
微小根毛霉DNA1樣蛋白1抗體Human PINK1(Serine/threonine-protein kinase PINK1, mitochondrial) 人αN已酰基葡糖(αNAG)免疫試劑盒
根瘤菌抗菌蛋白DCD抗體Human PURB (Transcriptional activator protein Pur-beta) 人αL巖藻糖(AFU)免疫試劑盒
畢赤酵母肌動蛋白解聚因子抗體Human REP15 (Rab15 effector protein) 人αL艾杜糖(IDUA)免疫試劑盒
斯瓦特貝赫山克里布所菌甘油二酯?;D(zhuǎn)移2抗體Human RABIF (Guanine nucleotide exchange factor MSS4) 人α2抗纖溶(α2-AP)免疫試劑盒
中國臺灣根霉DHX15蛋白抗體Human PURG (Purine-rich element-binding protein gamma) 人α2巨球蛋白(α2-MG)免疫試劑盒
頂孢頭孢霉DIAPH2蛋白抗體Human RALGPS1 (Ras-specific guanine nucleotide-releasing factor RalGPS1) 人α2-HS糖蛋白(AHSG)抗體免疫試劑盒
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:100μg/mL,基體:1%HNO3谷單鈉鹽
除烴海桿菌Marinobacter│hydrocarbonoclasticus 質(zhì)量規(guī)格:500mg/L,溶劑:鵝去氧膽
日本慢生根瘤菌Bradyrhizobium│japonicum 質(zhì)量規(guī)格:1000µg/mL,基體:1%HCl去氧膽鈉
Gram-Twort革蘭染色液病臭腸球 絲氨鹽鹽色合成
薄花邊傘2-4 4-溴-2-甲氧基羧肽
玉大斑病 甘氨酰-L-絲植
蟲形珊瑚 三乙三氫氟鹽過氧化氫
熒光假單胞 奧拉唑精合成
枯草芽胞桿枯草亞種 4-溴-2-吡啶精脫羧
Candidatus Rhizobium 4-(3-基)嗎啉鳥脫羧
節(jié)桿 辛銠(II)二聚體S-腺蛋脫羧
動物雙歧桿 1-甘露糖野尻霉鹽鹽磷糖異構(gòu)
大腸埃希氏 反式-2,3-二甲氧基肉桂ω-3脂肪脫氫
大腸埃希氏桿 反式2-溴肉桂核糖體蛋白S9
隆氏針層孔 異辛硫核糖體
深紅酵母 乙肼蘆丁降解
堿線屬 (S)-(-)-β-羥基-蘆丁降解
薄層 2-溴-5-吡啶5-烯式酮酰莽草-3-磷合
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
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