細(xì)胞質(zhì)染色試劑盒-C01-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9866

產(chǎn)品介紹:

C01細(xì)胞質(zhì)染色試劑盒是利用C 系列探針進(jìn)行細(xì)胞質(zhì)染色的試劑盒。本試劑盒中的C01細(xì)胞質(zhì)染色探針為綠色熒光標(biāo)記的細(xì)胞質(zhì)探針，具有490/515nm的大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)。

C系列探針是對(duì)活細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)進(jìn)行選擇性染色的一類(lèi)熒光染料，該系列探針可以選擇性標(biāo)記細(xì)胞質(zhì)，只需要納摩爾級(jí)(nM)濃度即可有效標(biāo)記活細(xì)胞。

C系列探針可自由穿過(guò)細(xì)胞膜，適用于觀(guān)察細(xì)胞質(zhì)內(nèi)部生物合成及相關(guān)發(fā)病機(jī)理。

C系列細(xì)胞質(zhì)探針具有多種顏色可以選擇，可根據(jù)情況對(duì)樣品進(jìn)行多色標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。除了本試劑盒的綠色熒光探針，還可以提供紅色、藍(lán)色、橙色等顏色的染色試劑盒。

C01細(xì)胞質(zhì)綠色熒光探針有強(qiáng)的疏水性，能夠輕易穿透活細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞后，被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成膜非滲透性的極性分子CF，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)，使胞質(zhì)發(fā)出強(qiáng)綠色熒光。CA 大激發(fā)波長(zhǎng)490nm，大發(fā)射波長(zhǎng)520nm。實(shí)際檢測(cè)時(shí)推薦使用的激發(fā)波長(zhǎng)為488nm 左右，發(fā)射波長(zhǎng)為 510～530nm?？梢允褂昧魇郊?xì)胞儀或激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞。

除了針對(duì)細(xì)胞質(zhì)的C 系列熒光染色產(chǎn)品，還可以為您各種N 系列、M 系列、E 系列、G 系列和L 系列細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、線(xiàn)粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)熒光染色試劑盒，以及鈣離子、鈉離子、神經(jīng)細(xì)胞等各種熒光染色試劑盒產(chǎn)品。

儲(chǔ)存條件：染料-20℃避光保存；避免反復(fù)凍融；稀釋液2-8℃保存。

有效期：六個(gè)月。

中文名稱(chēng)：細(xì)胞質(zhì)染色試劑盒-C01

英文名稱(chēng)：

產(chǎn)品規(guī)格：500T

貨號(hào)：FS-X9866

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

美拉唑磺?；铮?biāo)準(zhǔn)品）英文名： Glipizide癌胚抗原相關(guān)粘附分子1抗體包裝500ml

美拉唑鎂（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Donepezil HCl趨化樣因子受體1抗體包裝1g

美拉唑鈉一合物（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Estrone造血干抗原CD133抗體包裝1g

沙坦酯（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： EstroneG蛋白偶聯(lián)受體相互作用蛋白1抗體（補(bǔ)體Clq TNF相關(guān)蛋白1）包裝250mg

沙拉秦鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Clindamycin HCl心肌營(yíng)養(yǎng)1抗體包裝5g

沙利鉑（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Clindamycin HClC型凝集結(jié)構(gòu)域家族1成員B抗體包裝5g

沙普秦（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Verapamil HCl陽(yáng)離子通道相關(guān)蛋白β亞基抗體包裝1g

硝唑（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Verapamil HCl特異性蛋白57抗體包裝250mg

扎格雷（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Mycophenolic acidL選擇抗體包裝1g

扎格雷鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Mycophenolic acidCD53抗體包裝25g

巴卡丁 III（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Amoxicillin 死亡同源蛋白6抗體包裝5g

柳氮鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Amoxicillin 離子通道KB抗體包裝25g

巴龍霉（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： FenofibrateC型凝集結(jié)構(gòu)域家族12成員A抗體包裝5g

巴芬(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Fenofibrate離子通道蛋白2抗體包裝1g

巴芬雜質(zhì)A（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： ProbenecidC型凝集結(jié)構(gòu)域家族9成員A抗體包裝25mg

蠟狀芽孢桿菌Bacillus│cereus 質(zhì)量規(guī)格：≥630µg/mg,BR,可用于培養(yǎng)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子試劑盒新芒果;neomangiferin

銅綠假單胞菌Pseudomonas│aeruginosa 質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1試劑盒香紫蘇內(nèi)酯;clareolide

17507=AS1.3432=JCM12465=T3-B9資源名稱(chēng): 太湖新鞘菌質(zhì)量規(guī)格：HPLC>95%,標(biāo)準(zhǔn)品血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子121試劑盒香草;Vanillic acid
細(xì)胞質(zhì)染色試劑盒-C01黑曲霉蛙皮精

擬盤(pán)多毛孢屬 5-溴苊流行性出血熱

紅菇順式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯甲酯甘膽抗體

Pseudomonas guariconensis 2,4-二甲氧基苯硫氧還蛋白還原

糙皮側(cè)耳 -反式-1,2-環(huán)己二乙脫氫7

產(chǎn)紅青霉正辛基 α-D-葡萄糖C多肽

聚生殼 3-硝基對(duì)酚核糖體S6激

豹斑鵝膏 4-O-(β-吡喃半乳糖)-D-吡喃甘露糖曲霉

釀酒酵母 3-甲氧基苯乙組三聚體核結(jié)合蛋白2

堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿 α-槐糖單水合物總1型膠原氨基端延長(zhǎng)肽

臭紅菇 L-3-苯乳羥甲基戊二酰合

水稻黃單胞(水稻白葉枯)* 2-溴-4-氟-1-苯,高遷移率族蛋白

康寧木霉氨基六甘單甲醌氧化還原1

玫瑰考克氏 Bradykinin Fragment 2-9巨病IgA抗體

成團(tuán)泛亞磺鈉蛋白質(zhì)羧基

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