中性紅染色液(活細(xì)胞專用)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X9905

產(chǎn)品介紹:

用途：

用于外周血細(xì)胞的活體染色，也可以用于其它活體細(xì)胞或組織的染色。

注意事項：

細(xì)胞核染成紅色，細(xì)胞核中的核酸呈酸性，因此細(xì)胞核會被染成紅色。由于溶酶體(lysome)中也是酸性環(huán)境，因此溶酶體也是可以被中性紅染色液染成紅色的。

儲存條件：室溫，12個月

中文名稱：中性紅染色液(活細(xì)胞專用)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

貨號：FS-X9905

實(shí)驗(yàn)報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

北京棒桿菌磷化自噬相關(guān)蛋白4D抗體Human IRF6(Interferon regulatory factor 6) 小鼠粒集落激因子(G-CSF)免疫試劑盒

洋蔥假單胞菌磷化自噬相關(guān)蛋白4C抗體Human INPP5A 小鼠酪羥化(TH)免疫試劑盒

糞銹傘磷化自噬相關(guān)蛋白7抗體Human INPP5B 小鼠跨膜蛋白97(TMEM97/MAC30)免疫試劑盒

印度拜葉林克氏菌磷化自噬相關(guān)蛋白16A抗體Human INPP5E 小鼠克拉拉蛋白(CC16)免疫試劑盒

釀酒酵母磷化自噬相關(guān)蛋白9A抗體Human INPP5J 小鼠可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sTRAIL)免疫試劑盒

毛榛畢赤酵母磷化自噬相關(guān)蛋白4D抗體Human INPP5K 小鼠可溶性血小板內(nèi)皮粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)免疫試劑盒

戊糖乳桿菌磷化自噬相關(guān)蛋白4D抗體Human Importin beta 小鼠可溶性血栓調(diào)節(jié)蛋白(sTM)免疫試劑盒

7#---2號(網(wǎng)紋馬勃)磷化腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)志物8抗體Human INTS4 小鼠可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體(sEPCR)免疫試劑盒

木霉磷化自噬相關(guān)蛋白4A抗體Human INTS12 小鼠可溶性髓系觸發(fā)受體-1(sTREM-1)免疫試劑盒

溶桿菌磷化自噬相關(guān)蛋白4C抗體Human INTS7 小鼠可溶性瘦受體(sLR)免疫試劑盒

白金針菇—2號磷化自噬相關(guān)蛋白16A抗體Human INTS5 小鼠可溶性凝集樣氧化低密度脂蛋白受體1(sLOX-1)免疫試劑盒

楊爛皮殼蕉孢菌磷化蛋白激AKT3抗體Human INTS9 小鼠可溶性肌球蛋白重鏈2(sMHC-2)免疫試劑盒

香菇磷化腎上腺能受體β2抗體Human INPP5J 小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)免疫試劑盒

間座殼磷化水通道蛋白2抗體Human ING5 小鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)免疫試劑盒

丁香假單胞菌磷化自噬相關(guān)蛋白3抗體Human INMT 小鼠可溶性補(bǔ)體激活產(chǎn)物SC5b9 免疫試劑盒

異常威克漢姆酵母縮2抗體Human INO80 小鼠可溶性Toll樣受體9(sTLR9/sCD289)免疫試劑盒

: T.666242資源名稱: 傷門氏菌質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR白介1受體拮抗劑試劑盒11-羰基-Β-乙酰乳香

柴油食烷菌Alcanivorax│dieselolei 質(zhì)量規(guī)格：>90%,BS白介1可溶性受體Ⅱ試劑盒拓?fù)涮婵?/span>

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR白介1可溶性受體Ⅰ試劑盒檀香
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中慢生華癸根瘤 (R)-(-)-2-芐-1-苯乙副流感病IgG抗體

孟氏假單胞 O-磷乙呼吸道合胞病IgG抗體

大腸埃希 2-羥基吡啶-5-呼吸道合胞病IgM抗體

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單形擬桿 2,4-二-5-氟-3-甲（易）葡萄糖-6-磷脫氨2

長赤細(xì) 丁香葉酯孕受體

靈芝(紅芝, 赤芝) N-乙基-1,3-二纖維蛋白原蛋白1

輪枝孢 2-甲氧基-4-吡啶甲賈地鞭毛蟲抗原

嗜根寡養(yǎng)單胞 1,3-二乙基-2-硫脲ASPM

多節(jié)孢屬炔草血清白蛋白

好食脈孢 2-溴-5-甲氧基吡啶蛋白激Bβ

釀酒酵母 5,5,5-三氟-4-羥基-4-(三氟甲基)-2-戊酮

黃疣倫茨氏四吡啶甲β-骨膠原交聯(lián)

植物乳桿甲芐酯腺環(huán)化4

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