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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> 紅色標(biāo)本保色液Ⅲ
貨號(hào) | FS-X10210 |
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產(chǎn)品介紹:
注意事項(xiàng): 由硼酸、亞硫酸等組成。在制作保色浸制標(biāo)本后,瓶口要用石蠟或者凡士林密封嚴(yán)實(shí),并避免陽(yáng)光直射。 儲(chǔ)存條件:室溫,12個(gè)月 |
中文名稱:紅色標(biāo)本保色液Ⅲ
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:500ml
貨號(hào):FS-X10210
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
啤酒神金黃桿菌葡萄糖合成2抗體Human THAP2 大鼠磷蛋白關(guān)聯(lián)鞘糖脂微區(qū)1(PAG1)免疫試劑盒
盾殼霉谷草轉(zhuǎn)2抗體Human THG1L 大鼠淋巴趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)免疫試劑盒
美澳型核果褐腐病菌葡萄糖-6磷脫氫抗體Human THEM4 大鼠淋巴功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)免疫試劑盒
黑曲霉葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5抗體Human THNSL2 大鼠亮?;?LAP)免疫試劑盒
白僵菌葡萄糖合成1抗體Human THOC1 大鼠粒巨噬集落激因子(GM-CSF)免疫試劑盒
果生鏈核盤菌G蛋白修補(bǔ)結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體Human TGIF2LX 大鼠粒集落激因子(G-CSF)免疫試劑盒
木賊鐮孢甘油激3抗體Human THOC2 大鼠類固5α還原1(SRD5A1)免疫試劑盒
唾液乳桿菌高爾基體磷蛋白3樣蛋白抗體Human TGM4 大鼠類風(fēng)濕因子(RF)免疫試劑盒
泡囊短波單胞菌磷化谷受體1抗體Human TFDP2 大鼠酪羥化(TH)免疫試劑盒
康氏木霉G蛋白修補(bǔ)結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體Human TFDP1 大鼠酪蛋白激JAK3(Jak3)免疫試劑盒
pDC316磷化G蛋白偶聯(lián)受體激相互作用蛋白1抗體Human SNX9(Sorting nexin-9) 大鼠克拉拉蛋白(CC16)免疫試劑盒
云芝磷化G蛋白偶聯(lián)受體激相互作用蛋白1Human TFE3 大鼠可溶性腫瘤壞死因子樣凋亡微弱誘導(dǎo)劑(sTWEAK)免疫試劑盒
灰樹(shù)花孔菌葡萄糖激調(diào)節(jié)蛋白抗體Human TFEB 大鼠可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sTRAIL)免疫試劑盒
土壤薄層菌GTP結(jié)合蛋白10抗體Human TFEC 大鼠可溶性血小板內(nèi)皮粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)免疫試劑盒
總狀毛霉磷化Ras GTP活化蛋白結(jié)合蛋白1抗體Human TFIP11 大鼠可溶性血纖蛋白單體復(fù)合物(SFMC)免疫試劑盒
Cerrena unicolorRas GTP活化蛋白結(jié)合蛋白1抗體Human TFPT 大鼠可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體(sEPCR)免疫試劑盒
鮭色諾卡氏菌Nocardia│salmonicolor 質(zhì)量規(guī)格:for HPLC,≥99.0%(T)異蓮心堿
結(jié)核分枝桿菌Mycobacterium│tuberculosis 質(zhì)量規(guī)格:for HPLC,≥99.0%綿馬ABA
秦氏蜜環(huán)菌Armillaria│qinii H.C. Wang & J. Zhao 質(zhì)量規(guī)格:離子對(duì)色譜級(jí)大黃-8-β-D-吡喃葡萄糖
紅色標(biāo)本保色液Ⅲ鱈鹽球 二苯基硅烷5α還原
土壤薄層 四溴雙S腎炎因子
茄鐮孢 DL-間酪頂體
蠟狀芽孢桿蕈狀變種 對(duì)溴芐DNA甲基化轉(zhuǎn)移
花臉香蘑 聚乙二二縮水甘油溶血
綠木霉 3-溴-4-甲氧基20-羥化二十碳四烯
寬鱗大孔 3,4-二羥基S轉(zhuǎn)移Mu5
硫黃色節(jié)桿 丁香乙酯過(guò)氧化1
釀酒酵母 2,4-二氟肉桂過(guò)氧化4
鉤狀木霉 5--2-氟過(guò)氧化5
食砜節(jié)桿 三溴化吡啶維生D結(jié)合蛋白
多孔木霉 2-溴-4-硝苯抗透明帶結(jié)合蛋白3抗體
側(cè)孢短小芽胞桿 2,4-二氟苯血清白蛋白
乳乳球乳亞種 1-芐基-3-甲氧羰基-4-酮鹽鹽環(huán)氧合2
香鬼筆 3-溴-4-L-精
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