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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> 增強(qiáng)革蘭氏染色液
貨號(hào) | FS-X10102 |
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中文名稱:增強(qiáng)革蘭氏染色液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:4×10ml|4×100ml|4×250ml
貨號(hào):FS-X10102
產(chǎn)品介紹:
用途: 革蘭氏細(xì)菌染色 注意事項(xiàng): 經(jīng)典革蘭染色法,主要由:結(jié)晶紫染色液、碘液、脫色液、復(fù)紅染液組成。染色結(jié)果為:菌體呈紫紅色。 儲(chǔ)存條件:室溫,避光,12個(gè)月 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
產(chǎn)黃青霉雙甲基精水解2抗體Human PAFAH1B1 (Plaet-activating factor acetylhydrolase IB subunit alpha) 人T表面糖蛋白CD1a(CD1A)免疫試劑盒
綠色木霉D酪激衰減蛋白1抗體Human PSKH1 (Serine/threonine-protein kinase H1) 人T淋巴白血病病Ⅰ/II(HTLV-Ⅰ/II)抗體免疫試劑盒
假單胞菌雙特異性酪磷化調(diào)節(jié)激3抗體Human LAMA3(Laminin subunit alpha-3) 人TU3A蛋白(TU3A)免疫試劑盒
栓菌肌營養(yǎng)蛋白α抗體Human PPME1 (Protein phosphatase methylesterase 1) 人Trem樣轉(zhuǎn)錄因子1(TREML1)免疫試劑盒
三葉草根瘤菌多巴β羥化抗體Human PXDC1 (PX domain-containing protein 1) 人Traf2結(jié)合蛋白(T2BP)免疫試劑盒
鏈霉菌抑癌基因抗體Human PCBP1(Poly(rC)-binding protein 1) 人Toll作用蛋白(TOLLIP)免疫試劑盒
耐輻射奇球菌DNA甲基轉(zhuǎn)移1抗體Human KCTD13 (BTB/POZ domain-containing adapter for CUL3-mediated RhoA degradation protein 1) 人Toll樣受體9(TLR-9/CD289)免疫試劑盒
考克氏菌DNA甲基轉(zhuǎn)移-3α抗體Human PCGF1 (Polycomb group RING finger protein 1) 人Toll樣受體7(TLR7)免疫試劑盒
釀酒酵母DNA甲基轉(zhuǎn)移-3β抗體Human PRDM1 (PR domain zinc finger protein 1) 人Toll樣受體6(TLR6)免疫試劑盒
番鴨細(xì)小病死亡受體3抗體Human PAQR5 (Membrane progestin receptor gamma) 人Toll樣受體5(TLR5)免疫試劑盒
綠毛殼死亡受體4抗體Human MOCOS(Molybdenum cofactor sulfurase) 人Toll樣受體4(TLR4)免疫試劑盒
單增李斯特氏菌精神分裂癥易感基因抗體Human DHTKD1 (Probable 2-oxoglutarate dehydrogenase E1 component DHKTD1, mitochondrial) 人Toll樣受體3(TLR3)免疫試劑盒
河流桿菌蓬亂蛋白1抗體Human PROKR1 (Prokineticin receptor 1) 人Toll樣受體2(TLR2)免疫試劑盒
鏈格孢(可訂購)肌Dystrobrevin β蛋白抗體Human PIPOX (Peroxisomal sarcosine oxidase) 人Toll樣受體1(TLR1)免疫試劑盒
孢小克銀漢霉輪生變種異常凝血原/脫-γ-羧基凝血原抗體Human ADCYAP1(Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide) 人TH糖蛋白(THP)免疫試劑盒
普氏糞桿菌結(jié)蛋白抗體Human PROSER1 (Proline and serine-rich protein 1) 人TGF-β誘導(dǎo)早期基因1(TIEG1)免疫試劑盒
ATCC16358=CBS281.34資源名稱: 紫紅曲霉 質(zhì)量規(guī)格:1000μg/ml;溶劑:1.5mol/L硝安五酯
毛殼Chaetomium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:1000μg/ml,介質(zhì):0.05mol/L NaOH連翹脂
木賊鐮刀菌Gibberella│intricans Wollenw. 質(zhì)量規(guī)格:1000μg/ml桃葉珊瑚
增強(qiáng)革蘭氏染色液嗜熱鏈球 2-(甲基)-3,4-二甲氧基吡啶 鹽鹽赤霉19
勒氏寡食單胞 2-(1-基)苯赤霉20
蘋果交鏈孢 腺-5'-二磷單鹽二水合物酮磷雙激
阪崎腸桿 N-(3-氨基基)甲基烯鹽 鹽鹽草氧化
枯草芽孢桿 (S)-吡咯烷-3-甲轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白
嗜熱脂肪地球芽胞桿 5-溴-2-羧二氫黃酮4-還原
微小毛霉 3--2-氟-5-(三氟甲基)吡啶脆裂病
綠針假單胞 喹啉-5-羧6-磷葡萄糖
斯氏假單胞 4-三氟甲基硫代苯甲酰6-磷果糖
日本根霉 (S)-5-溴甲基-2-吡咯烷酮環(huán)斑病
球形賴芽孢桿 [1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二化鈀南方菜豆花葉病
蠟?zāi)?/span> N,N-二甲基烯基脲(DMPU)南芥菜花葉病
黑曲霉 二苯基硝鹽酪蛋白激3
枯草芽孢桿 3--4-氟芐組蛋白H3.2
擬黑馬朗假絲酵母 甘-DL-苯tubby蛋白
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