細胞膜染色試劑盒(綠色熒光)-M01-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9868

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：細胞膜染色試劑盒(綠色熒光)-M01

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：1000T|5000T

貨號：FS-X9868

產(chǎn)品介紹:

細胞膜染色試劑盒是用一種親脂性的綠色熒光探針進行細胞膜染色。染色液O 進入細胞膜后，在整個細胞膜上擴散，佳濃度時可以使整個細胞膜染色。染色液O在進入細胞膜之前熒光非常弱，當與細胞膜結(jié)合后其熒光強度大大增強，被激發(fā)后可以發(fā)出綠色的熒光，具有很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命?？梢杂脴藴实腇ITC濾光片檢測。

染色液O 通常不會明顯影響細胞的活力，因此被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經(jīng)等細胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑(long-term tracer)。除了簡單的細胞膜熒光標記外，還可以用于檢測細胞的融合和粘附，檢測發(fā)育或移植過程中細胞遷移，通過FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)檢測脂在細胞膜上的擴散，檢測細胞毒性和標記脂蛋白等。

儲存條件：4℃避光保存。長期保存-20℃避光保存。

有效期：六個月。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

磺地平（標準品）英文名： Enrofloxacin CHIC2蛋白抗體包裝25g

（標準品）英文名： Enrofloxacin HCL磷化周期檢測點激1抗體包裝5g

,安息香(標準品)英文名： Enrofloxacin HCL磷化周期檢測點激2抗體包裝100ml

（標準品）英文名： Zolmitriptan磷化周期檢測點激2抗體包裝25ml

硝唑（標準品）英文名： Thymosin alpha 1 Acetate磷化周期檢測點激2抗體包裝50MG

硝唑（標準品）英文名： Tegafur磷化周期檢測點激2抗體包裝25g

扎曲普坦（標準品）英文名： Tegafur遺傳性脈絡(luò)膜缺乏癥相關(guān)蛋白抗體包裝5g

鈉（標準品）英文名： Acipimox遺傳性脈絡(luò)膜缺乏癥相關(guān)蛋白樣抗體包裝50MG

乙酯（標準品）英文名： Acipimox腺癌標志物CHMP2A抗體包裝1g

噻啶（標準品）英文名： Adapalene染色質(zhì)修飾蛋白CHMP6抗體包裝5g

妥英（標準品）英文名： Adapalene染色質(zhì)修飾蛋白CHMP5抗體包裝100g

妥英鈉（標準品）英文名： Adefovir間隙連接蛋白31.1抗體包裝25g

溴馬（標準品）英文名： Adefovir緊密連接蛋白10抗體包裝100g

扎貝特（標準品）英文名： alfacalcidol緊密連接蛋白23抗體包裝1g

扎（標準品）英文名： PS 48緊密連接蛋白22抗體包裝25g

: GIMSCAU1.048資源名稱: 肺炎克雷伯氏菌質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品血管緊張Ⅱ受體2抗體試劑盒柚皮甙二氫查爾;Naringin di

豌豆根瘤菌Rhizobium│leguminosarum 質(zhì)量規(guī)格：>99.0%血管緊張Ⅱ受體2試劑盒血根堿;Sanguinarine

谷棒桿菌Corynebacterium│glutamicum 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品血管緊張Ⅱ受體1抗體試劑盒香葉木;Diosmetin
細胞膜染色試劑盒(綠色熒光)-M01無藥品無檢查（陰性） 1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine內(nèi)肽2

海氏腸球 Ondansetron四氫還原

pK18mobsacB Brompheniramine hydrogen maleate巢蛋白

豇豆輪紋病 Calcitonin Gene Related Peptide ratADP-核糖基轉(zhuǎn)移1

*蛹蟲草（北冬蟲夏草、北蟲草） ONX-0914 (PR-957)黃熱病IgM抗體

小白蘑菇 Vortioxetine (Lu AA21004) HBrβ-防御130

殺鮭氣單胞 LDE225 (NVP-LDE225,Erismodegib)乙型肝炎病X抗原

層出鐮孢 PF-477736透明質(zhì)合1

大腸埃希氏 Quizartinib (AC220)透明質(zhì)合3

Pseudomonas psychrotolerans Tamibarotene低糖基化IgA

粗皮側(cè)耳（平菇） BKM120透明質(zhì)合1

秦氏蜜環(huán) PF-3716556透明質(zhì)合3

球毛殼 Influenza Hemagglutinin (HA) Peptide沙眼衣原體抗原

枯草芽孢桿 Atrial Natriuretic Peptide humanER脂筏相關(guān)蛋白2

草本枝孢 Vemurafenib (PLX4032, RG7204)幽門螺桿空泡IgG
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)