黑色標(biāo)本保色液-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10212

中文名稱：黑色標(biāo)本保色液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：2×250ml

貨號：FS-X10212

產(chǎn)品介紹:

注意事項：

有硫酸銅、乙醇等組成。如出現(xiàn)沉淀，可過濾后再使用。在制作保色浸制標(biāo)本后，瓶口要用石蠟或者凡士林密封嚴(yán)實，并避免陽光直射。

儲存條件：室溫，12個月

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

立枯絲核菌生長因子受體結(jié)合蛋白2相關(guān)接頭蛋白2抗體Human TEKT5 大鼠顆粒B(Gzms-B)免疫試劑盒

球孢白僵菌G蛋白α亞單位蛋白Q抗體Human O2 大鼠顆粒A(Gzms-A)免疫試劑盒

散生桿菌生長抑制DNA損傷基因GADD45β抗體Human EIF2AK2(Interferon-induced, double-stranded RNA-activated protein kinase) 大鼠抗中性粒核周抗體(pANCA)免疫試劑盒

紫色鏈霉菌生長抑制蛋白22抗體（甲基化控制J蛋白）Human Tenascin-R 大鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)免疫試劑盒

熱帶頭梗霉G蛋白偶聯(lián)受體39抗體Human TEX12 大鼠抗增殖核抗原(PCNA)抗體免疫試劑盒

腐皮鐮孢菌橋尾蛋白抗體Human TEX13A 大鼠抗(AT)免疫試劑盒

大隱球酵母半乳糖凝集8抗體Human TEX14 大鼠抗血小板抗體IgA(PA-IgA)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌糖磷脂酰肌錨定蛋白137抗體Human TEX15 大鼠抗血小板抗體(IgM)免疫試劑盒

北京擲孢酵母胰高血糖樣肽2受體抗體Human TEKT5 大鼠抗血小板抗體(IgG)免疫試劑盒

*蛹蟲草生長休止特定蛋白1抗體Human O2 大鼠抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)免疫試劑盒

華特拉根瘤菌γ-谷酰轉(zhuǎn)移輕鏈1抗體Human EIF2AK2(Interferon-induced, double-stranded RNA-activated protein kinase) 大鼠抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)免疫試劑盒

宇佐美曲霉γ1基丁受體α5/GABRα5抗體Human Tenascin-R 大鼠抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)免疫試劑盒

枯草芽胞桿菌枯草亞種G蛋白激活內(nèi)向通道1抗體Human ALDH5A1(Succinate-semialdehyde dehydrogenase, mitochondrial) 大鼠抗心肌抗體(AMA)免疫試劑盒

灰色鏈霉菌灰色亞種G蛋白激活內(nèi)向通道3抗體Human TERF1(omeric repeat-binding factor 1) 大鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)免疫試劑盒

Bacillus aryabhattaiG蛋白偶聯(lián)受體48抗體Human TDRD3 大鼠抗人生長激抗體(IgG)免疫試劑盒

馬賽菌糖基轉(zhuǎn)移GLT8D2抗體Human TDG 大鼠抗平滑肌抗體(ASMA)免疫試劑盒

: HBUM78133資源名稱: 鏈霉菌質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)丹參

: AS3.2806資源名稱: 雅致枝霉質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品環(huán)黃芪

大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)β-桉葉
黑色標(biāo)本保色液蘋果黑腐皮殼二單對硝基芐酯弓形蟲

白地霉 (R)-1-(1-萘基)乙CD20分子

溜曲霉 (R)-(+)-1-苯基乙抗脊髓灰質(zhì)炎Virues1-3 IgG抗體

白乳菇 1,16-十六烷二抗傷寒Vi多糖IgG抗體

柔嫩艾美耳球蟲 4-溴-2-苯兔抗傷寒Vi多糖IgM抗體

蘇云金芽孢桿 3--2-吡啶羥基類固脫氫

季也蒙假絲酵母 2--6-氟-苯甲腸道病71型抗體

滅酵母 2-氨基-6-溴苯去乙?；?/span>

四脊裸胞殼 2,3,4-三氟苯沉默調(diào)節(jié)蛋白2

鏈桿 3,4-二氟苯克拉拉蛋白

釀酒酵母 2-氟-6-沉默調(diào)節(jié)蛋白2

炭黑曲霉 2,3-二氟溴苯可溶性Toll樣受體2

蜜蜂類芽胞桿 2-肟乙乙酯玉赤霉烯酮

膜醭畢赤酵母甲基二黃曲霉B1

微球 4-溴-2,6-二氟甲酯球蛋白G2a亞型抗體

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