橘黃G6染色液-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X9908

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：橘黃G6染色液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100ml|500ml

貨號：FS-X9908

產(chǎn)品介紹:

用途：

細(xì)胞學(xué)樣本常規(guī)染色，尤其適用于婦科細(xì)胞學(xué)涂片染色、細(xì)胞脫落標(biāo)本染色。

注意事項(xiàng)：

OG6與EA50或EA36聯(lián)合使用，可以將細(xì)胞漿染成鮮明的綠色、藍(lán)色、粉色。注意密閉干燥保存。

儲存條件：室溫，12個(gè)月

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

蒂蓋姆頭珠霉肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白2（2號染色體）抗體Human IFIT2 小鼠抗甲狀腺過氧化物抗體(TPO-Ab)免疫試劑盒

相思根瘤菌三磷腺檸檬裂解抗體Human ICA1L 小鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)免疫試劑盒

那波鏈霉菌β淀粉樣蛋白前體結(jié)合蛋白B-1抗體Human ICAM2(Intercellular adhesion molecule 2) 小鼠抗環(huán)胍肽抗體(Anti-CCP-antibody)免疫試劑盒

谷棒桿菌內(nèi)收蛋白a1抗體Human ICT1 小鼠抗核小體抗體(IgG)免疫試劑盒

平菇α2纖溶色上皮衍生因子抗體Human IFT81 小鼠抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)免疫試劑盒

羅爾細(xì)薄菌膜粘連蛋白7抗體Human ICK 小鼠抗核抗體IgG 免疫試劑盒

根腐平臍蠕孢早老γ分泌抗體Human IFT80 小鼠抗弓形蟲抗體(IgG)免疫試劑盒

布氏乳桿菌鈉ATP蛋白a1抗體Human IFIT3 小鼠抗弓形蟲IgM抗體免疫試劑盒

psilent-dual1(pSD1)Rho鳥交換因子2抗體Human IFT88 小鼠抗單核抗體(AMA)免疫試劑盒

哈氏弧菌磷化Rho鳥交換因子2抗體Human IFITM2(Interferon-induced transmembrane protein 2) 小鼠抗促甲狀腺受體抗體(TRAb)免疫試劑盒

銅綠假單胞菌(綠膿桿菌)*去整合樣金屬蛋白9抗體Human IFIT5 小鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)免疫試劑盒

產(chǎn)色葡萄球菌艾滋病病制約錨定蛋白抗體Human IFITM1(Interferon-induced transmembrane protein 1) ELISA Kit小鼠抗Smith抗體(Sm)免疫試劑盒

變異鹽單胞菌腺環(huán)化1抗體Human IFNA6 小鼠抗IVIgG抗體免疫試劑盒

裂褶菌核糖核L抑制蛋白抗體Human IFRD1 小鼠抗IgE受體抗體免疫試劑盒

沙壤土桿菌Rho GTP激活蛋白24抗體Human IFRD2 小鼠卷曲螺旋域結(jié)合蛋白80(CCDC80)免疫試劑盒

東方伊薩酵母GTP激活蛋白ASAP3抗體Human IFI30 小鼠巨噬移動抑制因子(MIF)免疫試劑盒

泊庫島食烷菌Alcanivorax│borkumensis 質(zhì)量規(guī)格：BR白介18結(jié)合蛋白試劑盒商陸皂乙

鐮孢屬Fusarium│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR白介18試劑盒絲石竹皂元3-O-B-D葡萄糖酯

廈門海旋菌Thalassospira│xiamenensis 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR白介17F試劑盒松香
橘黃G6染色液冷海水黃桿 2'-OMe-Bz-C亞磷酰單體磷脂酰肌激-3催化亞基α基因

杏鮑菇磺化酞菁鈷(II)p110α

乳酒假絲酵母培叔丁鹽白介10

側(cè)耳 N-苯甲?；?5'-O-(4,4-二甲氧基三苯甲基)-2'-O-[(叔丁基)二甲基硅基]腺-3'-低密度脂蛋白-膽固

蠟蚧瑞格非尼一水合物色P4503A5

釀酒酵母 5-降烯-2-羧乙酯谷氨酰轉(zhuǎn)肽

繡球* 硫代硫鎂六水化合物組織型激肽釋放

根瘤屬 N-乙?；?5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-2'-脫氧胞胃蛋白原

黑腐皮殼 5-酮基-2-甲氧基苯磺酰甲狀腺球蛋白IgG抗體

枯草芽孢桿 4-甲酯游離雌三

黑曲霉正癸基乙酯鸚鵡衣原體IgG

土生類諾卡氏齊留通結(jié)膜靜脈曲張IgG

鏈霉 2-辛炔甲酯結(jié)膜靜脈曲張IgM

無花果曲霉氧銻沙門氏IgG抗體

黑曲霉 4-(4-硝基芐基)吡啶沙門氏IgM抗體
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)