細(xì)胞骨架染色試劑盒-C12-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9870

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：500T

貨號：FS-X9870

產(chǎn)品介紹:

細(xì)胞骨架(cytoskeleton)是真核細(xì)胞中由蛋白質(zhì)聚合而成的三維的纖維狀網(wǎng)架體系。細(xì)胞骨架包括微絲、微管和中間纖維。細(xì)胞骨架在維持細(xì)胞形態(tài)，承受外力、保持細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)的有序性方面起重要作用。細(xì)胞骨架肌動蛋白是球形的、大約42kd的蛋白，在幾乎所有的真核細(xì)胞都存在。這是一個非常保守的蛋白，在各物種差異不超過20%。肌動蛋白是兩種細(xì)胞內(nèi)絲狀結(jié)構(gòu)的構(gòu)成單體：微絲(三種主要的細(xì)胞骨架成分之一)，以及細(xì)肌絲(是肌肉細(xì)胞收縮復(fù)合物的一部分)。肌動蛋白參與很多重要的細(xì)胞功能，包括肌肉收縮，細(xì)胞移動，細(xì)胞分裂和胞質(zhì)分裂、小泡和細(xì)胞器的運(yùn)動、細(xì)胞信號，以及細(xì)胞連接和細(xì)胞形態(tài)的保持和建立。

顯示細(xì)胞骨架的常用方法有兩種：骨架蛋白染色法和免疫熒光染色法。骨架蛋白染色法具有簡單易行的特點，但不能區(qū)分骨架蛋白的組成，有些類型的纖維太細(xì),在光學(xué)顯微鏡下無法分辨，常用于骨架形態(tài)及完整性研究；免疫熒光染色法可特異顯示骨架蛋白，是用一種微絲解聚抑制劑,它與肌動蛋白纖絲有強(qiáng)親和作用,使肌動蛋白纖絲穩(wěn)定,抑制解聚,且只與F-actin 結(jié)合.因此,利用熒光標(biāo)記可以清晰顯示細(xì)胞中微絲的形態(tài),利用熒光顯微鏡對熒光標(biāo)記的細(xì)胞骨架進(jìn)行觀察,可以得到清晰的實驗結(jié)果.具有更普遍的應(yīng)用意義。

儲存條件：染料-20℃避光保存；稀釋液2-8℃保存。

有效期：六個月。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

芐雜質(zhì)A（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Anidulafungin著絲粒蛋白Q抗體包裝1g

別嘌（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Ansamitocin P-3CENTA2蛋白抗體包裝5g

泊酚(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Aprepitant胞吞再循環(huán)相關(guān)銜接蛋白CENTB1抗體包裝1g

谷（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Tenofovir磷化胞吞再循環(huán)相關(guān)銜接蛋白CENTB1抗體包裝25g

磺舒（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： TenofovirCENTD1蛋白抗體包裝5g

硫氧嘧啶（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： AripiprazoleCENTG3蛋白抗體包裝100ml

硫異煙(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Aripiprazole中心體蛋白3抗體包裝25ml

睪（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Ascomycin,FK520中心體蛋白1+2抗體包裝500ml

交沙霉（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Ascomycin,FK520中心體蛋白2抗體包裝25g

倍他索（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Atazanavir中心體蛋白CEP120抗體包裝5g

戊鎂（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Atazanavir中心體蛋白CEP128抗體包裝5g

戊鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Atomoxetine HCl中心體蛋白CEP170抗體包裝1g

生坦合(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Atomoxetine HCl尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子4抗體包裝25g

沙康唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Atovaquone銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白CUTC抗體包裝5g

(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： AtovaquoneCUTL1蛋白抗體包裝1g

木霉Trichoderma│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>99%血管緊張Ⅰ轉(zhuǎn)化試劑盒香蒲新;typhaneoside

枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格：>99.0%血管緊張Ⅰ受體抗體試劑盒辛夷脂;Fargesin

出芽短梗霉Aureobasidium│pullulans 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品血管緊張Ⅰ試劑盒小豆蔻明;cardamonin
細(xì)胞骨架染色試劑盒-C12卡坦正青霉 Lesinurad肝脂肪

摩洛哥芽孢桿 Anacetrapib無翅型MMTV整合位點家族成員5

熱帶假絲酵母 Neuromedin B ≥90%腺脫氨1

發(fā)狀孢囊游動放線 CAL-101腺脫氨1

秦氏蜜環(huán) 神經(jīng)激肽B顎口線蟲

灰耳擔(dān)布勒酵母 Carfilzomib同工

巴氏醋桿羅旺亞種人、鼠促腎上腺皮質(zhì)釋放因子B連接蛋白

傘枝犁頭霉 Mildronate dihydrate熱休克蛋白90α

沙漠畢赤酵母 Empagliflozin (BI 10773)絨毛膜促性腺抗體

黑曲霉 Medetomidine HCl核糖核還原M2肽

葡萄座腔 Medetomidine神經(jīng)生長因子受體p75

芽孢桿屬 (1R,2R)-N,N'-二羥基-N,N'-雙(二苯基乙?；?環(huán)己烷-1,2-二細(xì)螺旋體病

短芽孢桿 Motesanib Diphosphate (AMG-706)N-甲基-D-天冬

仙臺鏈霉 Foretinib (GSK1363089)N-甲基-D-天冬受體

阪崎克羅諾桿 AZD8931 (Sapitinib)空泡相關(guān)蛋白A-IgG

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