當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> 芽孢染色液(Scharffer-Fulton法)
貨號 | FS-X10108 |
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培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:2×20ml|2×50ml
貨號:FS-X10108
產(chǎn)品介紹:
用途: 又稱芽胞染色液,觀察菌體芽孢結(jié)構(gòu) 注意事項(xiàng): 染色后菌體為紅色,芽孢為綠色。 儲(chǔ)存條件:室溫,避光,12個(gè)月 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
紡織品 4-基偶氮 磷化真核延伸因子激2抗體Human IVL(Involucrin) 人ICOS配體(ICOSLG)免疫試劑盒
冬青節(jié)桿菌纖連蛋白4抗體Human NCEH1 (Neutral cholesterol ester hydrolase 1) 人ICE蛋白激活因子(IRAP)免疫試劑盒
葡萄座腔菌延伸因子結(jié)合蛋白EFTUD2抗體Human NINJ1 (Ninjurin-1) 人I 型膠原蛋白(COL I)免疫試劑盒
弗吉尼亞鏈霉菌表皮生長因子樣蛋白6抗體Human NPTXR(Neuronal pentraxin receptor) 人H-鈣粘著蛋白/H-鈣粘連蛋白(H-Cad/CDH13)免疫試劑盒
谷棒桿菌磷/磷二酯家族成員6抗體Human NPFF (Pro-FMRFamide-related neuropeptide FF) 人HSP60 IgM抗體免疫試劑盒
鹽漬芽孢桿菌屬核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ENT1抗體Human MAP2(Microtubule-associated protein 2) 人HSP60 IgG抗體免疫試劑盒
假單胞菌核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ENT2抗體Human NPSR1 (Neuropeptide S receptor) 人HSP60 IgA抗體免疫試劑盒
小孢矛束霉鳥核交換因子4Human NLK (Serine/threonine-protein kinase NLK) 人H-ras 免疫試劑盒
曲霉磷化紅膜條帶4.1蛋白抗體Human NETO1 (Neuropilin and tolloid-like protein 1) 人HLAⅡ類組織相容性抗原,DPα1鏈(HLA-DPA1)ELSIA 試劑盒
霍氏腸桿菌磷化酪蛋白激受體B1抗體Human GAP43(Neuromodulin) 人HIV-1 TAT互動(dòng)蛋白2(HTATIP2/TIP30)免疫試劑盒
堀越氏芽孢桿菌蛋白激受體B1+B2抗體Human NSF (Vesicle-fusing ATPase) 人HIV(1+2)抗原抗體免疫試劑盒
白色念珠菌磷化神經(jīng)鳥置換因子Ephexin1抗體Human Nitric oxide synthase-interacting protein 人H5型病(H5N1)抗體(IgG)免疫試劑盒
Marisediminicola磷化Ephrin B抗體Human AIRE(Autoimmune regulator) 人G蛋白偶聯(lián)受體152(GPR152/PGR5)免疫試劑盒
山茶惡性腫瘤丟失蛋白EPLIN抗體Human NMI (N-myc-interactor) 人G蛋白偶聯(lián)受體109A(GPR109A)免疫試劑盒
黑曲霉磷化紅生成受體抗體Human NRP2 (Neuropilin-2) 人G蛋白偶聯(lián)膽汁受體1(GPBAR1)免疫試劑盒
岸海桿狀菌磷化HER2受體抗體Human NHEJ1 (Non-homologous end-joining factor 1) 人G蛋白偶聯(lián)雌激受體1(GPR30)免疫試劑盒
類球紅細(xì)菌Rhodobacter│sphaeroides 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.5%
雞傷門氏菌Salmonella│gallinarum 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.3%槐角
葡萄座腔菌Botryosphaeria│dothidea (Moug.) Ces. & De Not. 質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=5%
芽孢染色液(Scharffer-Fulton法)枯草芽孢桿 5-乙基-3-羥基-4-甲基-2(5H)-呋喃酮色P450
副球?qū)?/span> 2-溴-N,N-二硫化氫
大腸埃希氏桿 2,6-二氟芐基半胱脫巰基
慢生根瘤 甲基烯甲氧基乙酯乙脫氫
杏鮑菇(13 ) 1-乙酰基-2,3,5-三苯甲酰氧基-1-beta-D-呋喃核糖纖維合成
大豆慢生根瘤 1-甲基-2-吡咯羧類胡蘿卜
芽孢桿屬 2--4-(三氟甲氧基)苯藻紅蛋白
芽胞桿 八乙烯基-POSS藻藍(lán)蛋白
Boc-L-脯氨蘋果
蘇云金芽孢桿鲇澤亞種 7-硝基-2-羧雙A
焦曲霉 7-硝基α-淀粉
玫瑰皮黃鏈霉 二苯亞甲基甘乙酯脫落合成
樟疫霉 5-芐氧基-3-甲生長合成
貝萊斯芽胞桿 位己內(nèi)酯磷脂D
大腸埃希氏 苯并環(huán)(BCB)長鏈脂肪
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
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