細胞色素氧化酶染色液(對苯二銨法)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10002

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：細胞色素氧化酶染色液(對苯二銨法)

英文名稱：

產品規(guī)格：4×50ml

貨號：FS-X10002

產品介紹:

用途：

細胞色素氧化酶染色

注意事項：

主要由Co孵育液、Lugol碘液、鈷鹽溶液、陰性對照等組成，染色后酶活性部位呈棕綠色。

儲存條件：4℃，避光，6個月

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

*發(fā)根土壤桿菌6號染色體開放閱讀框50抗體Human rT3(Reverse Triiodothyronine) 人糖脂抗體(glycolipid)免疫試劑盒

尖槐藤根瘤菌1號染色體開放閱讀框151抗體Human SCG2(Secretogranin II) 人糖盞蛋白免疫試劑盒

黑褐鵝膏菌腫瘤壞死因子受體超家族成員9抗體Human RXFP1(Relaxin/Insulin Like Family Peptide Receptor 1) 人糖原磷化同工MM(GP-MM)免疫試劑盒

高盧根瘤菌復合前列腺特異性抗原單克抗體Human RNASE(Ribonuclease) 人糖原磷化同工II(GP-II)免疫試劑盒

松口蘑組織蛋白z抗體Human SDH(Succinate Dehydrogenase) 人糖原磷化同工BB(GP-BB)免疫試劑盒

鮑魚菇2號染色體開放閱讀框84抗體Human RNASEN(Ribonuclease III, Nuclear) 人糖原磷化(GP)免疫試劑盒

枯草芽胞桿菌枯草亞種磷化鈣/鈣調依賴蛋白激2α抗體Human sdLDL(Small Dense Low Density Lipoprotein) 人糖原合成激3(GSK-3)免疫試劑盒

樟疫霉組織蛋白A抗體Human RNASET2(Ribonuclease T2) 人糖原合成激(GSK)免疫試劑盒

擬康寧木霉CD34抗體Human RPS6Kβ1(Ribosomal Protein S6 Kinase Beta 1) 人糖原合成免疫試劑盒

擬青霉周期D3抗體Human Sec23b(protein transport protein Sec23B) 人糖缺失性轉鐵蛋白(CDT)免疫試劑盒

嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌緊密連接蛋白1抗體(C端)Human RTN4(Reticulon 4) 人糖皮質激受體β(GR-β)免疫試劑盒

蓋氏海桿狀菌轉錄調節(jié)因子C/EBP α 抗體Human rT3(Reverse Triiodothyronine) 人糖皮質激受體α(GR-α)免疫試劑盒

帚狀曲霉核黃轉運蛋白2抗體Human proPSA(precursor of Prostate Specific Antigen) 人糖磷脂酰肌(GPI)免疫試劑盒

大腸埃希菌磷化鈣介質抗體Human RARS(Arginyl tRNA Synthetase, cytoplasmic) 人糖類抗原72-4(CA72-4)免疫試劑盒

粘孢白僵菌7號染色體開放閱讀框26抗體Human RARα(Retinoic Acid Receptor Alpha) 人糖類抗原50(CA50)免疫試劑盒

黃曲霉衰變加速因子CD55抗體Human PRR4(Proline Rich Protein 4, Lacrimal) 人糖類抗原19-9(CA19-9)免疫試劑盒

海桿狀菌Marinobacter│sp. 質量規(guī)格：活：>200 NADP units/mg,BCc-fos 二氫歐山芹醋酯

假單胞菌Pseudomonas│sp. 質量規(guī)格：>98%,BRCDCP1試劑盒二氫魚藤

指狀青霉Penicillium│digitatum 質量規(guī)格：>96%,BRCD8分子試劑盒二氫黃連堿
細胞色素氧化酶染色液(對苯二銨法)紅色紅曲辛基異羥肟可溶性Aβ寡聚體

Erwinia aphidicola 4-(N,N-二甲基)苯溴化鎂溶液抗球蛋白

燕麥狀曲霉 Val-Thr可溶性FMS樣酪激1

間胞囊 4--2-甲基-1H-吡咯并[2,3-d]嘧啶絲狀血球凝集

白蘑菇 (2S,3S)-(+)-2,3-雙(二苯基膦基)雙環(huán)[2.2.1]庚-5-烯FK506結合蛋白8

白地霉 (R)-1,4-苯并二噁烷-2-甲Ring1和YY1結合蛋白

冬菇代三叔丁基磷化金(I)外核三磷二磷水解2

白色鹽多孢二[(±)-BINAP]二金(I)LIM半胱豐富域蛋白1

紫色團胞鏈霉水解乳蛋白絲;蘇激26

運動節(jié)桿 3'-氨基-2',3'-雙脫氧鳥甘露糖結合凝集2

粘孢白僵偶氮胂IARMC6

釀酒酵母 4,4'-二苯基-1,1'-聯(lián)萘-5,5'-二磺二鹽分裂周期因子42

運動節(jié)桿柳葉酯蛋白激Bα

產黃青霉砷甜菜堿標準溶液環(huán)指蛋白5

藍伏革 Merocyanin 540無翅型MMTV整合位點家族成員7A
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)