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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> 堿性磷酸酶染色液(改良Gomori鈣鈷法)
貨號(hào) | FS-X10009 |
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英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:3×50ml|3×100ml
貨號(hào):FS-X10009
產(chǎn)品介紹:
用途: 堿性磷酸酶染色,適用于石蠟切片 注意事項(xiàng): 屬于金屬沉淀法,堿性磷酸酶活性出呈棕黑色,可能出現(xiàn)假陽(yáng)性,采用陰性對(duì)照。二甲苯應(yīng)采用AR以上級(jí)別。 儲(chǔ)存條件:4℃,避光,6個(gè)月 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
楊奇青霉1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框84抗體Human NPYR5(Neuropeptide Y Receptor Y5) 人腎上腺髓質(zhì)(ADM)免疫試劑盒
沙諾氏芽孢桿菌E3泛蛋白連接CHIP蛋白抗體Human NRG-3(Neuregulin 3) 人腎上腺能a1A受體(ADRA1A)免疫試劑盒
幼角鐮孢肉堿O-乙酰基轉(zhuǎn)移Human OVA sIgE(Ovalbumin Specific IgE) 人腎上腺(EPI)免疫試劑盒
黑色附球霉5號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框45抗體Human OVA sIgG(Ovalbumin Specific IgG) 人腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)免疫試劑盒
大腸埃希菌5號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框48抗體Human OXA(Orexin A) 人蛋白(nephrin)免疫試劑盒
雅致枝霉6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框136抗體Human NRG-4(Neuregulin 4) 人腎(RNLS/MAO-C)免疫試劑盒
谷棒桿菌6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框138抗體Human PCIII(Procollagen III) 人神經(jīng)軸突絲蛋白(NAFP)自身抗體免疫試劑盒
季也蒙邁耶氏酵母6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框145抗體Human PCI(Protein C Inhibitor) 人神經(jīng)元凋亡抑制蛋白(NAIP)免疫試劑盒
大孔菌CD39抗體Human PDIA5(Protein Disulfide Isomerase A5) 人神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(NT-3)免疫試劑盒
嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框106抗體Human PDIA6(Protein Disulfide Isomerase A6) 人神經(jīng)型一氧化氮合成(nNOS)免疫試劑盒
黃色糖多孢菌6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框115抗體Human PDK4(Pyruvate Dehydrogenase Kinase Isozyme 4) 人神經(jīng)粘著分子(NRCAM)免疫試劑盒
居真菌細(xì)菌屬6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框123抗體Human PCNA(ProlifeRating Cell Nuclear Antigen) 人神經(jīng)粘附分子配體1(NCAM-L1/CD171)免疫試劑盒
少根根霉6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框129抗體Human PDP(Pyruvate Dehydrogenase Phosphatase) 人神經(jīng)特異性烯化(NSE)免疫試劑盒
纖維單胞菌6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框129抗體Human NT-ProANP(N-Terminal Pro Atrial Natriuretic Peptide) 人神經(jīng)肽Nesfatin-1 免疫試劑盒
金黃桿菌6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框132抗體Human PEX2(Peroxisomal Biogenesis Factor 2) 人神經(jīng)絲蛋白M(NF-M)免疫試劑盒
孔狀短小莖點(diǎn)霉磷化鈣調(diào)磷B亞基B1抗體Human PCPE1(Procollagen C Proteinase Enhancer 1) 人神經(jīng)絲蛋白L(NF-L)免疫試劑盒
海桿菌Marinobacter│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRCD147分子試劑盒大黃葡萄糖
小盾殼霉Coniothyrium│minitans 質(zhì)量規(guī)格:>99%,標(biāo)準(zhǔn)品CD146分子試劑盒
: NRRLB-12526資源名稱: 運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRCD134分子試劑盒多舌飛蓬
堿性磷酸酶染色液(改良Gomori鈣鈷法)青霉 2,2-雙(2-羥基-5-聯(lián)苯基)烷Enah;Vasp樣蛋白
土曲霉 (S)-(+)-3(芐氧羰基)-5-氧代-4-惡唑啉乙去乙?;疭irtuin-2
腸膜明串珠 甲基(三苯基膦)金(I)腺環(huán)化8
芽孢桿屬 (R)-(+)-2-(二苯甲基)吡咯烷基質(zhì)金屬蛋白15
蒙氏假單胞 9-UndecynoicAcid基質(zhì)金屬蛋白16
玉龍小單孢 4-(2,6,6-trimethyl-1-cyclohexen-1-yl)-3-buten-2-ol抗IgG抗體
大豆慢生根瘤 N,N-二乙基對(duì)苯胞尿鳥結(jié)合蛋白
枯草芽胞桿 1S,2S)-(+)-[1,2-Cyclohexanediamino-N,N'-bis(3,5-di核糖體蛋白S19
綠粘帚霉 2-氨基辛異亮氨基
哈茨木霉 三水埃索美拉唑鎂SCD62P
滑菇 3,3,3-三(對(duì))細(xì)小病IgG抗體
毛木耳 3-硫-異硫脲基磺細(xì)小病IgM抗體
釀酒酵母 2-甲氧基-4-磺酰8羥基脫氧鳥抗體
類阿達(dá)青霉 a-葡糖-a-葡糖4-羥基壬烯
根瘤 二[(R)-(+)-2,2′-二(二苯基膦)-1,1′-聯(lián)萘基][(1R,2R)-(+)-1,2-芳香化
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