茜素紅S染色試劑盒-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9758

產(chǎn)品介紹:

茜素紅S染色試劑中的茜素紅S可通過(guò)與鈣離子和其他金屬離子發(fā)生鰲和反應(yīng)而形成可以在顯微鏡下直接觀察的帶顏色的復(fù)合物。本產(chǎn)品就是基于此原理而開(kāi)發(fā)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1．即開(kāi)即用，用戶不需要單獨(dú)準(zhǔn)備各種溶液。

2．操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。

3．可用于組織切片中的鈣沉積，尤其適用于骨細(xì)胞或組織的病理和生理研究。

4．可用于檢測(cè)動(dòng)物原生代或培養(yǎng)細(xì)胞的鈣沉積。

5．本產(chǎn)品為通用型，不但用于鈣離子的檢測(cè)，還可用于FeCl2和CdCl2的檢測(cè)。

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。

中文名稱(chēng)：茜素紅S染色試劑盒

英文名稱(chēng)：Alizarin Red S Staining Kit

產(chǎn)品規(guī)格：100mL

貨號(hào)：FS-X9758

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

血小板反應(yīng)蛋白(THBS1)英文名：THBS1 色CYP3A抗體包裝25g

血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)英文名：TM 色cP450 CYP20A1抗體包裝5g

血清淀粉樣蛋白A2(SAA2)英文名：SAA2 色cP4501B1抗體包裝1g

血清淀粉樣P物質(zhì)(SAP)英文名：SAP 色cP450 CYP26A1抗體包裝5g

血紅氧合2(HO2)英文名：HO2 磷化周期E抗體包裝100mg

血紅氧合1(HO1)英文名：HO1 磷化周期E2抗體包裝5g

血紅蛋白(HB)英文名：HB 周期M3抗體包裝1g

血管抑(ANG)英文名：ANG 周期Y/X抗體包裝250mg

血管性血友病因子(vWF)英文名：vWF 磷化周期D3抗體包裝1g

血管細(xì)胞粘附分子1(VCAM1)英文名：VCAM1 色b5還原3抗體包裝1g

血管生成樣蛋白7(ANGPTL7)英文名：ANGPTL7 CWC22蛋白抗體包裝250mg

血管生成樣蛋白3(ANGPTL3)英文名：ANGPTL3 9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框95抗體包裝5g

血管生成樣蛋白2(ANGPTL2)英文名：ANGPTL2 19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框67抗體包裝10MG

血管生成樣蛋白1(ANGPTL1)英文名：ANGPTL1 磷化酪蛋白激1γ1+γ2+γ3抗體包裝100ml

血管生成4(ANGPT4)英文名：ANGPT4 原卟啉氧化3抗體包裝25ml

ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白抗體泛交叉反應(yīng)蛋白(UCRP)N/A
茜素紅S染色試劑盒細(xì)鏈格孢檸檬二鈉鹽絲裂原活化蛋白激4

暗擬莖點(diǎn)霉（可訂購(gòu)）檸檬哌水合物絲裂原激活的蛋白激;MAP激

產(chǎn)卟啉桿 9,9'-螺二芴斯鈣1

產(chǎn)黑鏈霉 2-溴-4,5-二氟斯鈣2

針葉樹(shù)散斑殼 4-咪唑死亡受體3

球孢白僵 3,4-二氟死亡受體5

葡萄座腔 4,5-二咪唑四氫生物蝶呤

稻生黃單胞 4,4-二氟鹽鹽松弛H2

球孢白僵 (1R,2S)-1-叔丁氧羰基氨基-2-乙烯基環(huán)烷甲松弛肽;松弛

強(qiáng)壯根瘤 2-溴-6-氟吡啶性成纖維生長(zhǎng)因子

雙孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇) 3-吡啶基偕肟性成纖維生長(zhǎng)因子1

日本色鹽桿 2--1-嗎琳乙-1-酮髓過(guò)氧化物

運(yùn)動(dòng)節(jié)桿乙酰乙乙酯鈉鹽髓過(guò)氧化物特異性抗中性粒胞質(zhì)

腐皮鐮孢三(2,4-戊二酮)銦(III)髓鞘堿性蛋白

新鞘氨 4-氨基-2--5-甲基嘧啶髓鞘堿性蛋白抗體

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