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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> 真菌保存液Ⅲ
貨號(hào) | FS-X10196 |
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產(chǎn)品介紹:
用途: 用于液體浸制真菌標(biāo)本的制作。對(duì)于灰、白、淺黃或淡褐色真菌的保存推薦此液。 注意事項(xiàng): 主要由硫酸鋅、福爾馬林等組成。 儲(chǔ)存條件:室溫,避光,12個(gè)月 |
中文名稱:真菌保存液Ⅲ
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100ml
貨號(hào):FS-X10196
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
瓜類鞘單胞菌胃泌抑制肽受體抗體Human TRIM24 大鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)免疫試劑盒
大腸埃希氏桿菌粒-巨噬集落激因子受體α抗體Human TRIM2 大鼠糖皮質(zhì)類固受體(GR)免疫試劑盒
假單胞菌屬硫轉(zhuǎn)移pi基因抗體Human TRAT1 大鼠糖類抗原199(CA199)免疫試劑盒
氏假單胞菌接頭蛋白Gab 2抗體Human TRAV20 大鼠糖類抗原125(CA125)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌葡萄糖6磷α/G6Pase-α抗體Human TRIM23 大鼠糖化血紅蛋白A1c(A1c)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌糖磷脂酰肌抗體Human SRSF2(Serine/arginine-rich splicing factor 2) 大鼠糖蛋白130(gp130)免疫試劑盒
球孢鏈霉菌黃色變種乙二1抗體Human TRBV5-4 大鼠碳酐2(CA-2)免疫試劑盒
棒曲霉核呼吸因子2抗體Human DCT(L-dopachrome tautomerase) 大鼠碳酐(CA)免疫試劑盒
類干酪乳桿菌腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因GDIA1抗體Human TREML4 大鼠胎盤生長(zhǎng)因子(PLGF)免疫試劑盒
長(zhǎng)雙歧桿菌腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因GDIA2抗體Human TRAP1 大鼠羧甲基賴(CML)免疫試劑盒
普通層褶菌胰高血糖抗體Human TRAPA/SSR1 大鼠羧化不全骨鈣(ucOC)免疫試劑盒
香菇線粒體甘油3磷酰基轉(zhuǎn)移抗體Human TRAT1 大鼠髓樣觸發(fā)性受體2(TREM2)免疫試劑盒
橄欖色毛殼磷脂?;鞍拙厶?/span>-6抗體Human TRAV20 大鼠髓系觸發(fā)受體-1(TREM-1)免疫試劑盒
抗性微桿菌磷二羥酰基轉(zhuǎn)移抗體Human SRSF2(Serine/arginine-rich splicing factor 2) 大鼠髓鞘相關(guān)糖蛋白(MAG)免疫試劑盒
粉褶環(huán)柄菇囊性組織液體蛋白15抗體Human TRBV5-4 大鼠髓鞘堿性蛋白抗體(MBP antibody)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌磷化接頭蛋白Gab2抗體Human TRAP1 大鼠髓磷脂堿性蛋白(MBP)免疫試劑盒
真菌保存液Ⅲ異常漢遜酵母異常變種 2,3-二基乙酯腺脫氨
白金針14 4-甲氧基鹽鹽消退D1
異常漢遜酵母 2--5-基異酯硝基酪
相思根瘤 5-硝基噻吩-3-羧小膠質(zhì)特異性標(biāo)志物
蘇云金芽胞桿 4-咪唑心肌肌鈣蛋白Ⅰ
雞傷門氏 4'-氟-2-羥基苯乙酮心肌特異性肌鈣蛋白T
腐皮殼 B-2-二苯并呋喃基心鈉
棉子糖乳球 1-溴乙基乙酯鋅-α2糖蛋白
產(chǎn)克雷伯氏 三(2-烯酰氧乙基)異脲酯(含穩(wěn)定劑吩噻)鋅原卟啉
紫色紅曲 3--4-硝基三氟甲苯新飽食分子蛋白1
玉黑粉 2-甲基-4-羧基吡啶信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子6
釀酒酵母 四氫吡喃-4-甲酰信號(hào)3A
鐮刀屬 五氟化(4-苯基)硫信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7
枯草芽孢桿 5-乙?;?2-羥基苯甲酰性結(jié)合球蛋白
杏鮑菇 2,4-二-5-異氧基苯肼胸腺基質(zhì)生成
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