細(xì)胞膜完整性檢測(cè)試劑盒-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9872

產(chǎn)品介紹:

E42細(xì)胞膜完整性檢測(cè)試劑盒是利用E系列探針進(jìn)行細(xì)胞染色的試劑盒。本試劑盒中的E42 細(xì)胞染色探針為紅色熒光標(biāo)記的細(xì)胞探針，具有550/683nm 的大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)。

E42探針是對(duì)細(xì)胞膜損傷細(xì)胞進(jìn)行染色的試劑，不能穿透正常細(xì)胞膜，只有當(dāng)細(xì)胞膜完整性受到影響時(shí)才可以染色細(xì)胞，進(jìn)入細(xì)胞后會(huì)與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)緊密結(jié)合，可有效標(biāo)記膜不完整細(xì)胞。

儲(chǔ)存條件：染料-20℃避光保存；避免反復(fù)凍融；稀釋液2-8℃保存。

有效期：一年。

中文名稱：細(xì)胞膜完整性檢測(cè)試劑盒

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：500T

貨號(hào)：FS-X9872

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

醋唑（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Lamotrigine軟骨性蛋白1抗體包裝500g

醋芬（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： D-Galacturonic acid富含半胱蛋白結(jié)合蛋白抗體包裝25g

醋磺米(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： D-Galacturonic acidCREB調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄激活因子3抗體包裝5g

醋萘氫（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Calcitriol軟骨相關(guān)蛋白CRTAP抗體包裝250g

醋己定（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Candesartan cilexetil1號(hào)染色體開放閱讀框100抗體包裝50g

醋麥迪霉（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Candesartan cilexetil1號(hào)染色體開放閱讀框104抗體包裝1g

醋曲安（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Canertinib1號(hào)染色體開放閱讀框112抗體包裝5g

達(dá)卡巴(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： 2-Guanidinoethylmercaptosuccinic Acid 1號(hào)染色體開放閱讀框113抗體包裝1g

達(dá)沙替（無）（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Carbetapentane citrate/Pentoxyverine citrate1號(hào)染色體開放閱讀框114抗體包裝25g

達(dá)托霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Carprofen1號(hào)染色體開放閱讀框109抗體包裝5g

大觀霉（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： CarprofenCD93抗體包裝5ml

丹蒽醌（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Catharanthine1號(hào)染色體開放閱讀框110抗體包裝25g

丹皮酚磺鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Albendazole1號(hào)染色體開放閱讀框111抗體包裝5g

丹曲林鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Albendazole1號(hào)染色體開放閱讀框106抗體包裝100mg

單硝異山梨酯（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Cerivastatin sodium 色P450 11A1抗體包裝500mg

青霉菌屬菌種Penicillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格：≥98.50%;Src抑制劑旋毛蟲抗體試劑盒新綠原;Neochlorogenic

丁桿菌Clostridium│acetobutylicum 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR溴脫氧核試劑盒; Coumarin

枯草芽孢桿菌Bacillus│sublitis 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品雄烯二試劑盒香蘭;Vanillin
細(xì)胞膜完整性檢測(cè)試劑盒谷棒桿 Atomoxetine HCl白介1β前體

大腸埃希 2,5-二氟苯轉(zhuǎn)錄因子維甲相關(guān)孤兒受體

黃曲霉對(duì)乙氧基膜攻擊復(fù)合物

豌豆根瘤 5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-2'-脫氧尿脂肪膜關(guān)聯(lián)蛋白

脆泊氏孔 3-氨基-4-氟色P45019A1

糞銹傘 4,5-亞甲二氧基-1,2-苯二CD47分子

意大利青霉 3-甲苯基硫代甲酰腎緊張A1

青海海境芽孢桿 4-甲苯基硫代甲酰CD68分子

直絲紫鏈霉 2-甲基-7-氮雜Ⅱ型前膠原羧基端肽

植物乳桿 Peptide YY porcineⅡ型原膠原N端前肽

圈卷產(chǎn)色鏈霉淺色變種 4-(二氟溴甲基)溴苯ⅡA型原膠原N端前肽

pGFP4412 2,3,6-三氟蛋白酪磷1B

球色單隔孢屬 4-甲基-4-(甲硫基)戊烷-2-酮T2

釀酒酵母異丁己酯結(jié)核分枝桿Y-干擾

PSI-6130羥賴吡啶啉

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