當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> 中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色液(NAP)
貨號(hào) | FS-X10011 |
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產(chǎn)品介紹:
用途: 專門用于血液或骨髓細(xì)胞涂片的中性粒細(xì)胞的堿性磷酸酶染色,又稱同時(shí)偶聯(lián)法。 注意事項(xiàng): 堿性磷酸酶活性部位呈藍(lán)色,位于胞槳中。油鏡下計(jì)數(shù)101個(gè)中性粒細(xì)胞,求出百分比和積分。非特異性反應(yīng)少,結(jié)果可靠。 儲(chǔ)存條件:4℃,避光,6個(gè)月 |
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:3×10ml|3×20ml
貨號(hào):FS-X10011
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
新城疫病羧酯2抗體Human NTRK2(Neurotrophic Tyrosine Kinase Receptor Type 2) 人上皮特異性抗原(ESA)免疫試劑盒
藤黃檀根瘤菌羧酯3抗體Human PⅢCP(Procollagen Ⅲ C-Terminal ProPeptide) 人傷寒抗體(St-Ab)免疫試劑盒
大腸埃希氏桿菌羧酯4A抗體Human PACAP-38(Pituitary Adenylate Cyclase Activating Polypeptide 38) 人傷寒(ST)抗體(IgM)免疫試劑盒
黑靈芝羧酯6抗體Human PADI4(Peptidyl Arginine Deiminase Type IV) 人傷寒(ST)抗體(IgG)免疫試劑盒
釀酒酵母Cezanne蛋白抗體Human MUC6(Mucin 6) 人山梨脫氫(SDH)免疫試劑盒
鏈霉菌內(nèi)臟移位線管蛋白CFC1蛋白抗體Human MYCBP(C-Myc Binding Protein) 人沙眼衣原體抗原(CT)免疫試劑盒
短密青霉補(bǔ)體因子H相關(guān)蛋白2抗體Human N-MID-OT(N-MID Osteocalcin) 人沙眼衣原體抗體(IgA)免疫試劑盒
巨大芽胞桿菌補(bǔ)體因子H相關(guān)蛋白4抗體Human MUSKab(Muscle Skeletal Receptor Tyrosine Kinase antibody) 人沙眼衣原體抗體(CT)IgG 免疫試劑盒
木層孔菌補(bǔ)體因子H相關(guān)蛋白5抗體Human NPYR1(Neuropeptide Y Receptor Y1) 人沙漠猬因子(DHH)免疫試劑盒
泡囊短波單胞菌7號(hào)染色體開放閱讀框28A抗體Human MYH10(Myosin Heavy Chain 10, Non Muscle) 人殺菌性/通透性增加蛋白(BPI)免疫試劑盒
*蜜環(huán)菌CpG結(jié)合蛋白抗體Human NPYR2(Neuropeptide Y Receptor Y2) 人殺菌肽(cecropin)免疫試劑盒
節(jié)桿菌CGG結(jié)合蛋白1抗體Human MYL1(Myosin Light Chain 1, Alkali, Fast Skeletal) 人色上皮衍生因子(PEDF)免疫試劑盒
長孢鏈霉菌cGMP依賴性蛋白激2抗體Human NAP(Neutrophil Alkaline Phosphatase) 人色酰tRNA合成(WARS)免疫試劑盒
銅綠假單胞菌結(jié)蛋白樣蛋白CGNL1抗體Human NAGase(N-Acetyl Beta-D-Glucosaminidase) 人色羥化(TPH)免疫試劑盒
奧氏蜜環(huán)菌生長調(diào)節(jié)蛋白CGREF1抗體Human MUC13(Mucin 13) 人三角形四肽重復(fù)蛋白1(TTC1/TPR1)免疫試劑盒
三葉草根瘤菌富含亮軟骨蛋白抗體Human MHCC/HLA-C(Major Histocompatibility Complex Class I C) 人三官能亞基β,線粒體(HADHB)免疫試劑盒
蘇云金芽孢桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRCC趨化因子受體5試劑盒燈盞花
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BCCC趨化因子受體2試劑盒東莨菪堿
小單孢菌屬菌種Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:BCCC趨化因子受體1試劑盒當(dāng)歸酰異五味子O
中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色液(NAP)蠟狀芽孢桿 一氧化異戊二烯諾瓦克病
谷棒桿 5-甲氧基-7-氮雜可溶性白介2受體a
中國臺(tái)灣根霉 3-水楊磷甲羥戊激
鐘器腐霉 N-(3-Hydroxydodecanoyl)-DL-homoserine lactone磷甲羥戊激
熱脂環(huán)芽胞桿 2,2′-聯(lián)吡啶-5,5′-二羧干燥綜合征抗原B
枯草芽孢桿 Phalloidin from Amanita phalloides乙型流感病
嗜麥芽寡養(yǎng)單胞 2-蒽磺酰尿氧化
紅菇屬 N-(3-Hydroxytetradecanoyl)-DL-homoserine lactone視黃脫氫5
亮葉耳環(huán)根瘤 1,3-金剛烷二甲球蛋白G Fc段
球孢白僵 (S)-3-異基-2,5-哌二酮心肌錨蛋白重復(fù)域23
長枝木霉 4-[2-(5--2-甲氧基苯甲酰氨基)乙基]苯磺酰套膜蛋白
豌豆根瘤 3,5-二苯基-4-(1-萘基)-1H-1,2,4-三唑羥烷基-脫氫,線粒體
毛栓孔 N-已?;獫{蛋白C1抑制劑
根霉屬的 乙(1S,2S)-N,N'-雙[(R)-2-羥基-2'-苯基-1,1'-聯(lián)萘基-3-基亞甲基]-1脯肽
地衣芽胞桿 1,3,5-三(4 - 羥基苯基)苯環(huán)氧化
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