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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> 新型隱球菌染色液
貨號(hào) | FS-X10110 |
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中文名稱:新型隱球菌染色液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:20ml
貨號(hào):FS-X10110
產(chǎn)品介紹:
用途: 莢膜染色,負(fù)染色液,主要用于新型隱球菌、某些病毒的染色 注意事項(xiàng): 染色后的樣品圖像呈現(xiàn)透明的亮光,而背景圖像呈黑色。 儲(chǔ)存條件:室溫,避光,12個(gè)月 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
谷棒桿菌結(jié)核分枝桿菌分泌性蛋白ESAT6抗體Human NDST1 (Bifunctional heparan sulfate N-deacetylase/N-sulfotransferase 1) 人EJ抗體/抗甘酰tRNA合成抗體(EJ/GlyRS)免疫試劑盒
蠟狀芽孢桿菌真核翻譯起始因子1抗體Human NRAP (Nebulin-related-anchoring protein) 人Egl九同源物1(EGLN1/C1orf12/PNAS-118/PNAS-137)免疫試劑盒
油菜菌核病菌上皮粘連調(diào)控蛋白ESRP2抗體Human MYRIP (Rab effector MyRIP) 人EB病早期抗原(EBEA)抗體(IgG)免疫試劑盒
施氏假單胞菌T和嗜性粒表達(dá)特應(yīng)性皮炎蛋白ETEA抗體Human MTMR1 (Myotubularin-related protein 1) 人EB病衣殼抗原(EBVCA)抗體(IgM)免疫試劑盒
泡盛曲霉電子轉(zhuǎn)移黃蛋白脫氫抗體Human KAT7(Histone acetyltransferase KAT7) 人EB病衣殼抗原(EBVCA)抗體(IgG)免疫試劑盒
惡臭假單胞菌EGF受體7跨膜結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體Human NEIL3 (Endonuclease 8-like 3) 人EB病核抗原3A抗體(IgM)免疫試劑盒
條紋白蟻傘乙激2抗體Human NAALAD2 (N-acetylated-alpha-linked acidic dipeptidase 2) 人EB病核抗原3A抗體(IgG)免疫試劑盒
傘枝犁頭霉磷化Ets轉(zhuǎn)錄因子家族e(cuò)ts1抗體Human NAALADL1 (N-acetylated-alpha-linked acidic dipeptidase-like protein) 人EB病核抗原1(EBNA1)抗體(IgG)免疫試劑盒
曲霉磷化上皮癌轉(zhuǎn)化蛋白2抗體Human MEAF6 (Chromatin modification-related protein MEAF6) 人EB病IgA(EBv IgA)免疫試劑盒
炭黑曲霉嗜性粒過氧化物抗體Human NOXO1 (NADPH oxidase organizer 1) 人EB病(Ebv)抗體(IgM)免疫試劑盒
Actinomadura cellulosilytica核內(nèi)切G抗體Human MYNN (Myoneurin) 人EB病(EBv)抗體(IgG)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌酪蛋白激受體A10抗體Human NDST1 (Bifunctional heparan sulfate N-deacetylase/N-sulfotransferase 1) 人E3泛蛋白連接TRIM68(TRIM68)抗體免疫試劑盒
河生腸桿菌胞吐囊復(fù)合體蛋白2抗體Human NRAP (Nebulin-related-anchoring protein) 人E3泛蛋白連接TRIM68(TRIM68)免疫試劑盒
網(wǎng)孢正青霉磷化4E結(jié)合蛋白1抗體Human MYRIP (Rab effector MyRIP) 人D-乳脫氫(D-LDH)免疫試劑盒
白假絲酵母磷化絲裂原活化蛋白激1/2抗體Human KAT7(Histone acetyltransferase KAT7) 人D-乳免疫試劑盒
冷溫木拉克酵母泛交聯(lián)抗體Human MEAF6 (Chromatin modification-related protein MEAF6) 人D二聚體(D2D)免疫試劑盒
多殺性巴氏桿菌Pasteurella│multocida 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99.5%(GC)α-辛腦
: Bt0209資源名稱: 蘇云金芽胞桿菌 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,>99%(GC)L-茶
解脂耶羅威亞酵母Yarrowia│lipolytica 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品美伐他汀
新型隱球菌染色液猴頭 1-甲基-1-乙基溴化吡咯烷天冬酰合成
鐮刀 1,4-環(huán)己二酮單-2,2-二甲基三亞甲基縮酮生長(zhǎng)
草青霉 5-溴咪唑并[1,2-A]吡啶淀粉
冠突曲霉 芐基化鎂色
埃切假絲酵母 甲酪
釀酒酵母 3-氨基吡-2-羧苯
乳菇屬 (S)-2-(芐氧羰基氨基)-2-苯-2-羥化
泌液克里格范瑞吉酵母 2-溴-4'-苯乙酮無色花青還原
大櫻桃葉細(xì)性穿孔病* 2--4-(甲基磺酰) (dry basis)苯-2-羥化
頭狀絲孢酵母 (S)-(+)-鄰扁桃無色花青還原
膠孢鐮孢 R(-)-鄰扁桃一氧化氮合成
淺紫灰鏈霉產(chǎn)色變種 2-氨基-5-甲酯木聚糖
醬油曲霉 3--4-甲磷油脫氫
雜色曲霉 2-氟-4-乙酰CoA
豬丹絲 2-氨基-4-氟Rubisco活化
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