細(xì)胞膜染色試劑CM-Dil-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X9873

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：200μl

貨號：FS-X9873

產(chǎn)品介紹:

細(xì)胞膜熒光染料CM-DiI 是一種新型細(xì)胞膜染料，通過與膜結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)分子結(jié)合而標(biāo)記細(xì)胞，適合監(jiān)測細(xì)胞運(yùn)動以及細(xì)胞定位分析。因具有良好的染料維持性，可用以追蹤多次傳代細(xì)胞的運(yùn)動特性。其有著強(qiáng)而穩(wěn)定的紅色熒光(Ex/Em=553/570nm)，與綠色熒光染料以及蛋白具有良好的熒光分辨性，適合做多重指標(biāo)染色。

CM-Dil水溶性較好，便于懸浮細(xì)胞和固定細(xì)胞染色溶液的制備；工作濃度下，此染料無細(xì)胞毒性，不會影響細(xì)胞活力以及增殖能力。一些細(xì)胞經(jīng)CM-Dil染色后，可在后續(xù)的固定，透化和石蠟包埋處理中維持穩(wěn)定的標(biāo)記，因此特別適用于同時(shí)做細(xì)胞膜標(biāo)記以及后續(xù)的免疫組化，熒光原位雜交或者電鏡觀察的實(shí)驗(yàn)。

研究證實(shí)，CM-DiI標(biāo)記后熒光在胞內(nèi)表達(dá)穩(wěn)定，陽性標(biāo)記率達(dá)98%以上，標(biāo)記細(xì)胞形態(tài)良好，能有效地觀察細(xì)胞在體外的誘導(dǎo)分化情況；或?qū)?biāo)記的細(xì)胞注入體內(nèi)，可以有效的顯示移植細(xì)胞在活體組織中的遷移及分化。

CM-DiI標(biāo)記細(xì)胞呈紅色熒光，熒光波長：λex=553 nm,λem=570 nm。

儲存條件：-20避光保存。

有效期：一年。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

空腸彎曲桿菌脂聯(lián)受體2抗體Human LSM8 豬去乙酰化饑餓激(dGHRL)免疫試劑盒

釀酒酵母ANGEL1蛋白抗體Human LSP1 豬去甲腎上腺(NE)免疫試劑盒

高粱生平臍蠕孢ANGEL2蛋白抗體Human LSR 豬趨化因子配體28(CCL28)免疫試劑盒

糞腸球菌ANKLE2蛋白抗體Human LTBP1(Latent-transforming growth factor beta-binding protein 1) 豬(HYD)免疫試劑盒

彩色豆馬勃特異性錨樣蛋白1抗體Human LUC7L 豬前列腺G/H合2(PTGS2)免疫試劑盒

黑曲霉錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白13B抗體Human LUC7L2 豬前列腺F2α(PGF2α)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白20A1抗體Human LY6D 豬前列腺E2(PGE2)免疫試劑盒

白色鏈孢囊菌錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白20A3抗體Human LUZP1 豬葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(GLUT2)免疫試劑盒

大腸埃希氏桿菌錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白22抗體Human LXN 豬皮質(zhì)抑/皮質(zhì)穩(wěn)定蛋白(CORT)免疫試劑盒

核盤菌（正確）錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白50抗體Human LSM10 豬皮質(zhì)(CORT)免疫試劑盒

假腸膜明串珠菌氫離子轉(zhuǎn)運(yùn)ATP合成6G抗體Human LY6E 豬皮質(zhì)類固結(jié)合球蛋白(SERPINA6)免疫試劑盒

瓶孢青霉錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體Human LSM11 豬皮質(zhì)(Cortisol)免疫試劑盒

勞地毛霉錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體Human LY6G5B 豬XIIIB鏈(F13B)免疫試劑盒

釀酒酵母型肝炎病核結(jié)合蛋白-1抗體Human LSM14A 豬XIIIA鏈(F13A1)免疫試劑盒

糙孢藍(lán)狀菌芳香基硫酯K抗體Human LRRC4C 豬X(F10)免疫試劑盒

粉紅粘帚霉神經(jīng)元突觸前膜蛋白抗體Human LRRC8C 豬ⅩⅢ(FⅩⅢ)免疫試劑盒

乳桿菌屬Lactobacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR補(bǔ)體片斷5b試劑盒左旋千金藤啶堿

大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR補(bǔ)體片斷5a試劑盒紫蘇

竹喙球菌Ceratosphaeria│phyllostachydis Zhang 質(zhì)量規(guī)格：活：20萬u/g補(bǔ)體片斷4b試劑盒竹紅菌乙
細(xì)胞膜染色試劑CM-Dil*灰葡萄孢 2,3,5,6-四溴對二甲苯BK病IgMkan抗體

假單胞異丁香葉酯磷酯Cε鏈1

釀酒酵母異丁橙花酯CD2關(guān)聯(lián)蛋白

龜裂鏈霉 2-氟烯甲酯轉(zhuǎn)化受體電位陽離子通道亞家族C成員6

金黃桿屬 5--2-三氟甲苯褐黑

產(chǎn)氨棒桿 5--2-甲苯γ谷氨酰轉(zhuǎn)移2

堀越氏芽孢桿 4-三氟乙優(yōu)黑

產(chǎn)朊假絲酵母檸檬鐵水合物雌酮1

薄層桿 3-溴-5-吡啶Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激1

產(chǎn)氨棒桿反式-4-乙酰氨基環(huán)己Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激2

狂犬病病 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine總巰基

少根根霉 (R)-1,2,3,4-四氫-1-萘色

粉狀畢翅酵母 3-吡啶甲脒蛋白聚糖

葡枝根霉 6-羥基吲唑雌受體β

豌豆根瘤 2,5-二溴吡總表皮生長因子受體

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