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當(dāng)前位置：上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學(xué)試劑>>細胞組織染色>> 真菌保存液Ⅰ
| 貨號 | FS-X10199 |
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產(chǎn)品介紹:
用途： 用于液體浸制真菌標(biāo)本的制作。一般真菌的保存推薦此液。 注意事項： 主要由乙醇、福爾馬林等組成。 儲存條件：室溫，避光，12個月 |
中文名稱：真菌保存液Ⅰ
英文名稱：
產(chǎn)品規(guī)格：100ml
貨號：FS-X10199
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
球孢白僵菌葡萄糖-6磷脫氫抗體Human TPRKB 大鼠蛋白(nephrin)免疫試劑盒
金針菇F5眼發(fā)育相關(guān)基因蛋白ODAG抗體Human TOR1AIP2(Torsin-1A-interacting protein 2) 大鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)免疫試劑盒
鼠李糖乳桿菌特異性囊腫病液體蛋白15Human TRA2A 大鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)免疫試劑盒
膠囊青霉特異性囊腫病液體蛋白15Human TPRX1 大鼠神經(jīng)營養(yǎng)的酪激1型受體(NTRK1)免疫試劑盒
深紅酵母生長激釋放因子受體抗體Human TPX2 大鼠神經(jīng)型一氧化氮合成(nNOS/NOS1)免疫試劑盒
灰色鏈球菌G蛋白偶聯(lián)受體115抗體Human TRAM2 大鼠神經(jīng)特異性烯化(NSE)免疫試劑盒
澳大利亞平臍蠕孢G蛋白偶聯(lián)受體10抗體Human TR2IT1 大鼠神經(jīng)肽Y(NPY)免疫試劑盒
釀酒酵母β-葡萄糖腦脂抗體Human TRAF1 大鼠神經(jīng)肽W(NP-W)免疫試劑盒
栗褐芽孢桿菌半乳糖凝集相關(guān)蛋白A抗體Human TRA2B(Transformer-2 Protein Homolog Beta) 大鼠神經(jīng)肽Nesfatin-1 免疫試劑盒
白吉利絲孢酵母半乳糖凝集12抗體Human TRADD 大鼠神經(jīng)絲蛋白(NF)免疫試劑盒
黃桿菌γ基丁運載蛋白3抗體Human TRAF3 大鼠神經(jīng)生長因子受體(TNFR superfamily,member 16)(NGFR)免疫試劑盒
釀酒酵母GTPIMAP家族成員1抗體Human TRAF3IP1 大鼠神經(jīng)生長因子前體(proNGF)免疫試劑盒
塔里木類芽孢桿菌GTPIMAP家族成員2抗體Human TPPP2 大鼠神經(jīng)生長因子(NGF)免疫試劑盒
紅色紅曲菌GTPIMAP家族成員3抗體Human Torsin A 大鼠神經(jīng)顆粒(NG/NRGN)免疫試劑盒
紅緣擬層孔菌GTPIMAP家族成員4抗體Human GDF10(Bone morphogenetic protein 3B) 大鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維性蛋白(GFAP)免疫試劑盒
明亮發(fā)光桿菌*GTPIMAP家族成員5抗體Human TOX2(TOX high mobility group box family member 2) 大鼠神經(jīng)降壓(NTS)免疫試劑盒
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：AR,6-10目或2-3mm連翹酯A
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：AR,8-16目或1-2mm桑根D
紅球菌Rhodococcus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：SPα-香附
真菌保存液Ⅰ絲狀支原體山羊亞種 2--4-甲氧基煙血栓調(diào)節(jié)蛋白
晶粒鬼傘 6-氟煙血纖蛋白原降解產(chǎn)物
青色鏈霉 5-氨基-2-甲氧基三氟甲苯血小板第三因子
青霉 2-苯甲酰血小板第四因子
血桿 甲基三苯基化磷血小板反應(yīng)蛋白;凝血敏感蛋白1
三葉膠灰星 3-乙氧羰基苯血小板活化因子
假灰鏈霉 N-氨基嗎啉血小板生成
佛雷德里克斯堡假單胞 N-異基哌血小板型磷果糖激
戴爾福特屬 DL-1-(1-萘基)乙血小板衍化生長因子BB
大腸埃希氏 2-(3-苯甲酰基苯基)-血小板衍生生長因子
長根靜灰球 6-溴-1-己延胡索
虎掌* 3-溴-4-眼小畸形關(guān)聯(lián)轉(zhuǎn)錄因子
枯草芽孢桿 L-芐酯對甲苯磺鹽氧化低密度脂蛋白
傳染性支氣管炎病 4-胍基鹽鹽氧化低密度脂蛋白抗體
Formosa 1,2-二甲基-1,4,5,6-四氫嘧啶氧化型
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