細胞膜紅色熒光探針(DiI)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9773

英文名稱：DiIC18(3)

產品規(guī)格：10mg

貨號：FS-X9773

產品介紹:

本探針是常用的細胞膜熒光探針之一，呈現(xiàn)橙紅色熒光。DiI是一種親脂性膜染料，進入細胞膜后可以側向擴散逐漸使整個細胞的細胞膜被染色。DiI在進入細胞膜之前熒光非常弱，僅當進入到細胞膜后才可以被激發(fā)出很強的熒光。DiI被激發(fā)后可以發(fā)出橙紅色的熒光，DiI和磷酯雙層膜結合后的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜參考下圖。其中，大激發(fā)波長為549nm，大發(fā)射波長為565nm。

分子式：C59H97ClN2O4

分子量：933.88

：41085-99-8。

DiI可以溶解于無水乙醇、DMSO和DMF，溶解度約為1-2.5mg/ml。發(fā)現(xiàn)較難溶解時可以適當加熱，并用超聲處理以促進溶解。

DiI被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經等細胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑。DiI通常不會影響細胞的生存力。被DiI標記的神經細胞在體外培養(yǎng)的條件下可以存活長達4周，在體內可以長達一年。DiI在經過固定的神經元細胞膜上的遷移速率為0.2-0.6mm/day，在活的神經元細胞膜上的的遷移速率為6mm/day。

DiI除了簡單的細胞膜熒光標記外，還可以用于檢測細胞的融合和粘附，檢測發(fā)育或移植過程中細胞遷移，通過FRAP檢測脂在細胞膜上的擴散，檢測細胞毒性和標記脂蛋白等。

用于細胞膜熒光標記時，DiI的常用濃度為1-25μM，常用的濃度為5-10μM。DiI可以直接染色活的細胞或組織，染色時間通常為5-20分鐘。對于固定的細胞或組織，通常宜使用配制在PBS中的4%多聚進行固定，使用其它不適當?shù)墓潭ㄒ簳е聼晒獗尘拜^高。

注意事項：熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

儲存條件：4℃避光，有效期一年。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

上皮中性粒細胞激活肽78(ENA78)英文名：ENA78 卷曲螺旋結構域蛋白25抗體包裝500mg

上皮性鈣黏附蛋白(CDHE)英文名：CDHE 卷曲螺旋結構域蛋白28A抗體包裝1g

上皮型脂肪結合蛋白(FABP5)英文名：FABP5 卷曲螺旋結構域蛋白28B抗體包裝5g

殺菌性/通透性增加蛋白(BPI)英文名：BPI 腫瘤/抗原74抗體包裝1g

色胺羥化2(TPH2)英文名：TPH2 卷曲螺旋結構域蛋白38抗體包裝25g

色胺羥化1(TPH1)英文名：TPH1 7號染色體開放閱讀框72抗體包裝5g

三葉因子3(TFF3)英文名：TFF3 卷曲螺旋結構域蛋白42抗體包裝100g

三葉因子2(TFF2)英文名：TFF2 卷曲螺旋結構域蛋白47抗體包裝25g

三肽基肽Ⅰ(TPP1)英文名：TPP1 卷曲螺旋結構域蛋白43抗體包裝5g

三磷腺(ATP)英文名：ATP 卷曲螺旋結構域蛋白46抗體包裝1g

三磷肌(IP3)英文名：IP3 卷曲螺旋結構域蛋白63抗體包裝1g

朊病毒蛋白(PRNP)英文名：PRNP 卷曲螺旋結構域蛋白54抗體包裝5g

軟骨關聯(lián)蛋白(CRTAP)英文名：CRTAP 卷曲螺旋結構域蛋白61抗體包裝100ml

軟骨寡聚基質蛋白(COMP)英文名：COMP 卷曲螺旋結構域蛋白8抗體包裝25ml

乳脂球表皮生長因子8(MFGE8)英文名：MFGE8 神經酰激CERK抗體包裝100g

: AS3.2783資源名稱: 泡盛曲霉質量規(guī)格：純度> 98%,BR，可用于培養(yǎng)轉化生長因子β激蛋白22試劑盒紫檀芪;Pterostilbene

平滑假絲酵母Candida│parapsilosis 質量規(guī)格：HPLC>98%,標準品轉化生長因子β3試劑盒竹節(jié)參皂IVa;Chikusetsu

普通變形桿菌Proteus│vulgaris 質量規(guī)格：純度>98%,BR,可用于培養(yǎng)轉化生長因子β2試劑盒梓酚;Catalponol
細胞膜紅色熒光探針(DiI)枯草芽孢桿 2,3-二羥基萘-6-磺鈉血管內皮生長因子受體1

釀酒酵母雙芬血管內皮生長因子受體2

枯草芽孢桿 2-氨基-4-溴甲酯血管內皮粘附分子1

熱帶假絲酵母一頻哪酮血管內皮抑

溜曲霉 2-氨基-3-溴吡啶血管黏附蛋白

棲藻海桿狀 3-基甲酯血管生成1

西蕃蓮莖基腐病 (S)-(-)-Alpha-氨基-Gamma-丁內酯鹽血管生成2

芽孢桿高鎳(II)六水合物, Reagent Grade血管生成受體酪激2

山柑芽孢桿 Fmoc-L-正纈血管生成樣蛋白2

假單胞屬 2-甲基-4-硝基吡啶血管生成樣蛋白3

繩狀籃狀 2-苯甲酰噻吩血管生長

Bacillus (4-)苯血管性血友病因子

金針菇—HP3 六水合磷鎂血紅蛋白

黑孢霉鎳六水合物血紅蛋白C

大腸埃希化釹六水合物血紅蛋白F

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