當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> 改良Palmgren神經(jīng)染色液
貨號(hào) | FS-X10068 |
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英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:5×50ml
貨號(hào):FS-X10068
產(chǎn)品介紹:
用途: 神經(jīng)纖維染色,采用甘銀浸鍍法,石蠟切片 注意事項(xiàng): 染色結(jié)果為:神經(jīng)軸突和神經(jīng)纖維成黑色或棕黑色。 儲(chǔ)存條件:4℃,避光,3個(gè)月 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
大腸埃希氏菌c-Myc tag標(biāo)簽抗體Human MXD1(Max dimerization protein 1) 人高密度脂蛋白膽固(HDL-C)免疫試劑盒
皮傘環(huán)子孢子蛋白(約氏瘧原蟲)抗體Human MNDA(Myeloid cell nuclear differentiation antigen) 人高密度脂蛋白3(HDL3)免疫試劑盒
波那雷恩沙門氏菌3號(hào)染色體開放閱讀框30抗體Human ORM2(Alpha-1-acid glycoprotein 2) 人高密度脂蛋白2(HDL2)免疫試劑盒
運(yùn)動(dòng)節(jié)桿菌CX3CL1抗體Human SPN(Leukosialin) 人高密度脂蛋白1(HDL1)免疫試劑盒
雅致小克銀漢霉脫羧蛋白體36抗體Human Opi(Opiorphin) 人高密度脂蛋白(HDL)免疫試劑盒
蟬花1-93號(hào)染色體開放閱讀框78抗體Human PLSCR1(Phospholipid scramblase 1) 人高靈敏度促甲狀腺激(U-TSH)免疫試劑盒
枯草芽胞桿菌過敏C5a/補(bǔ)體C5a抗體Human GLT25D1(Procollagen galactosyltransferase 1) 人高分子量脂聯(lián)(HMW Adiponectin)免疫試劑盒
氧化微桿菌卵巢癌抗原抗體Human LDHD(Probable D-lactate dehydrogenase, mitochondrial) 人高分子量角蛋白(CK-HMW)免疫試劑盒
淤泥大洋芽孢桿菌粘附分子相關(guān)蛋白a1抗體Human GSTA3(Glutathione S-transferase A3) 人高爾基體抗體(AGAA)免疫試劑盒
釀酒酵母21號(hào)染色體開放閱讀框69抗體Human IL26(Interleukin-26) 人高爾基蛋白73(GP-73)免疫試劑盒
毛木耳(紫木耳、黃背木耳)周期相關(guān)激抗體Human PVRL1(Poliovirus receptor-related protein 1) 人高半胱(Hcy)免疫試劑盒
金針菇癌相關(guān)抗原抗體Human LCN12(Epididymal-specific lipocalin-12) 人剛地弓形蟲(T.gondii)免疫試劑盒
穿孔假單胞菌半胱蛋白蛋白-6抗體(N端)Human CPA3(Mast cell carboxypeptidase A) 人肝脂(HL)免疫試劑盒
嗜淀粉乳桿菌周期依賴性激3抗體Human OAS3(2′-5′-oligoadenylate synthase 3) 人肝臟型脂肪結(jié)合蛋白(L-FABP)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌鈣調(diào)磷抗體Human PDXP(Pyridoxal phosphate phosphatase) 人肝臟甘油三脂脂肪(HTGL)免疫試劑盒
鏈格孢鈣蛋白1抗體Human TTN(Titin) 人肝生長因子受體(c-MET/HGFR)免疫試劑盒
NBRC3425T=IFO3425=ATCC7469資源名稱: 鼠李糖乳桿菌 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%短葶山麥冬皂C
根瘤菌Rhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%1,3-O-二咖啡??鼘?/span>
香菇Lentinula│edodes 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%鹽蘇堿
改良Palmgren神經(jīng)染色液毛木耳 3--2-4-香豆連接
大腸桿 N-芐氧羰基-L-苯氨6-芐氨基腺
聚生殼 2,4,6-三Bt-Cry1Ac蛋白
芽孢桿 甲基環(huán)氧烷氫ATP
禾生 2,5-二苯甲酰L-苯解氨
緊密帚枝霉 硫代嗎啉1,1-二氧化物鹽鹽NADPH氧化
三葉草根瘤 2,3-二-5-NADP蘋果
釀酒酵母 2,5-二-3-Rubisco活化
根瘤 N'-芐氧羰基-L-賴叔丁酯鹽鹽UDP-葡萄糖焦磷化
草地阿格雷氏 2-甲乙酯苯磺酰α酮戊二脫氫
孢淡灰鏈霉 6-氨基-3-噠甲β-1,3-葡聚糖
尖孢鐮刀 3,4-二甲β-葡萄糖
平田頭菇7-2 三苯基溴γ氨基丁
肉葡萄球(可訂) 葡萄糖鎂二水合物苯解氨
總狀毛霉 二溴熒光二
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