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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> 神經(jīng)HRP示蹤顯色液(TMB法)
貨號(hào) | FS-X10075 |
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產(chǎn)品介紹:
用途: 神經(jīng)HRP示蹤TMB(四甲基聯(lián))顯色,反應(yīng)較DAB法靈敏。 注意事項(xiàng): 主要由TMB孵育液、、乙酸鈉緩沖液等組成,染色后呈藍(lán)色。 儲(chǔ)存條件:4℃,避光,12個(gè)月 |
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:50T
貨號(hào):FS-X10075
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
金針菇組織蛋白G抗體Human RAG1(V(D)J recombination-activating protein 1) 人法尼基二磷法尼基轉(zhuǎn)移1(FDFT1)免疫試劑盒
解脂鹽紅菌激分子B7-1蛋白抗體Human DUT(Deoxyuridine 5′-triphosphate nucleotidohydrolase, mitochondrial) 人法尼X受體(FXR)免疫試劑盒
鴨疫里氏桿菌1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框145抗體Human SCARB1(Scavenger receptor class B member 1) 人二?;视?DAG/DG)免疫試劑盒
南類芽孢桿菌20號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框186抗體Human NFATC1(Nuclear factor of activated T-cells, cytoplasmic 1) 人二肽基肽Ⅳ(DPPⅣ)免疫試劑盒
猬木霉角蛋白7抗體Human HTN3(Histatin-3) 人二氫嘧啶脫氫[NADP+](DPYD)免疫試劑盒
溶血不動(dòng)桿菌基因型4間隙連接蛋白26抗體Human SRD5A1(3-oxo-5-alpha-steroid 4-dehydrogenase 1) 人二氫嘧啶樣3(DPYSL3)免疫試劑盒
貝倫格葡萄座腔菌膜輔蛋白抗體Human EPCA2(Early Prostate Cancer Antigen 2) 人二氫嘧啶樣2(DPYSL2)免疫試劑盒
鴨疫里氏桿菌F肌動(dòng)蛋白α1亞基抗體Human MADCAM1(Mucosal addressin cell adhesion molecule 1) 人二羥基賴正己(DHLNL)免疫試劑盒
抗生鏈霉菌CD8抗體Human NEO1(Neogenin) 人二磷腺(ADP)免疫試劑盒
黃桿菌CD8抗體Human NAIP(Baculoviral IAP repeat-containing protein 1) 人二磷尿核葡糖基轉(zhuǎn)移2家族肽B4(UGT2B4)免疫試劑盒
小孢根霉原變種表面趨化因子受體2抗體Human PACRG(Parkin coregulated gene protein) 人二氧化(DAO)免疫試劑盒
中慢生根瘤菌胱抑B/半胱蛋白抑制劑B抗體Human CX3CR1(CX3C chemokine receptor 1) 人兒茶抑免疫試劑盒
溜曲霉趨化樣蛋白抗體Human JUP(Junction plakoglobin) 人兒茶(CA)免疫試劑盒
多孢木霉角蛋白20抗體Human CFL1(Cofilin-1) 人鵝膏蕈堿免疫試劑盒
蘇云金芽胞桿菌鈣激活的中性蛋白2抗體Human EPCA2(Early Prostate Cancer Antigen 2) 人多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)免疫試劑盒
臭曲霉CD45RO抗體Human IZUMO1(Izumo sperm-egg fusion protein 1) 人多效生長(zhǎng)因子(PTN)免疫試劑盒
短鏈孢霉屬Selenotila│sp. 質(zhì)量規(guī)格:鈉型榿木
根霉Rhizopus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:for GC,≥99.5%(GC)款冬
Methanobrevibacter smithiiMethanobrevibacter smithii 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99.5%(GC)偽原薯蕷皂
神經(jīng)HRP示蹤顯色液(TMB法)水稻漢納酵母 N'-芴甲氧羰基-N-芐氧羰基-L-賴硝還原
需鈉弧 1-萘磺酰血紅氧合1
枯草芽孢桿 2,5-二血凝;凝集
禽腦脊髓炎病 2,5-二氟溴芐煙酰腺二核磷
大靈芝 1-丁基-3-甲基咪唑溴鹽氧化型
*櫻桃鏈格孢 2,6-二氟葉綠a
漢遜德巴利酵母 2-溴-4-甲基-5-氟吡啶葉綠b
稀疏鏈霉稀疏變種 1-N-Cbz-3-基葉綠
芽孢桿 吲唑-6-
三葉草根瘤 3-溴噠一氧化氮
產(chǎn)黑色鏈霉 2,5-二氨基苯磺胰蛋白抑制劑
黃桿 3-氨基-5-氟甲酯乙烯
藍(lán)色犁頭霉 3-溴-2-氟-4-乙酰羧化
白地霉 3-氨基-5-溴-2-甲氧基吡啶乙酰羧化
球毛殼 6-(1-甲基乙氧基)-3-吡啶甲乙酰羧化合成
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