當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> 革蘭氏菌染色鑒定試劑盒(Brown-Hopp)
貨號 | FS-X9877 |
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英文名稱:Brown-Hopp Staining Kit
產(chǎn)品規(guī)格:100次
貨號:FS-X9877
產(chǎn)品介紹:
產(chǎn)品特點(diǎn): 1. 操作簡單、染色穩(wěn)定。 2. 適用范圍廣,可以用于各種石蠟組織切片的染色。 3. 本試劑盒至少可以染色100張切片。 4. 本產(chǎn)品適用于用10%緩沖中性甲酸、2.5%-磷酸緩沖液、-Zenker固定液等固定的組織,但不適用于Bouin固定的組織。 保存條件:常溫,有效期半年。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
鏈霉菌雙鏈RNA腺脫基抗體(N端)Human LIN7C 豬肌激同工MB(CK-MB)免疫試劑盒
磚紅鐮刀菌腺單磷活化蛋白激α2抗體Human LILRA4 豬肌激(CK)免疫試劑盒
嗜熱鏈球菌腺激抗體Human LIMK2 豬肌紅蛋白(MB)免疫試劑盒
黑紫紅菇α2巨球蛋白樣蛋白1抗體 α2ML1Human LGI2 豬肌U型激,線粒體(CKMT1)免疫試劑盒
葡萄座腔菌屬凋亡相關(guān)蛋白3抗體Human LIMS1 豬饑餓激(GHRL)免疫試劑盒
傳染性喉氣管炎病肌動蛋白α/α-SMA/α Actin抗體Human LGI3 豬活性氧(ROS)免疫試劑盒
齒雙歧桿菌ATP結(jié)合蛋白家族7抗體Human LIMK2 豬活化蛋白C(APC)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌ASCL2蛋白抗體Human LIMS1 豬黃體生成(LH)免疫試劑盒
副豬嗜血桿菌磷化脊髓小腦失調(diào)癥蛋白1抗體Human LGI2 豬環(huán)磷腺(cAMP)免疫試劑盒
糞產(chǎn)堿菌糞亞種磷化活化轉(zhuǎn)錄因子1抗體Human LGP2 豬環(huán)磷鳥(cGMP)免疫試劑盒
小孢根霉華變種磷化活化復(fù)制因子2抗體Human LGI3 豬化學(xué)趨化因子(KC)免疫試劑盒
根瘤菌磷化活化復(fù)制因子2抗體Human LGR5 豬紅生成(EPO)免疫試劑盒
嗜熱脂肪地芽孢桿菌磷化活化復(fù)制因子2抗體Human LDLRAD1 豬黑皮質(zhì)受體-2(MC2R)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌磷化活化復(fù)制因子2抗體Human LDOC1 豬核因子-κB(NF-κB)免疫試劑盒
矩圓黑盤孢磷化活化復(fù)制因子2抗體Human LEF1 豬核受體亞家族1,H組,成員4(NR1H4)免疫試劑盒
鮭色鎖擲酵母磷化活化復(fù)制因子2抗體Human LGR6 豬含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪激2(Tie-2)免疫試劑盒
桃色擬青霉Paecilomyces│persicinus 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR補(bǔ)體蛋白3試劑盒醉椒
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR補(bǔ)體C1q腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白1試劑盒異連翹酯A
百日咳博德特氏菌Bordetella│pertussis 質(zhì)量規(guī)格:>98%(HPLC),USP補(bǔ)體7試劑盒氧海堿
革蘭氏菌染色鑒定試劑盒(Brown-Hopp)大腸埃希 3-磺酰基-4-氟沙眼衣原體IgM
玉黑粉 4-苯磺酰脲肝
香菇Cr04 β-內(nèi)啡肽,鼠前腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子
大腸埃希氏桿 2,5-二氟苯皰疹病-8型感染IgG抗體
尖孢鐮孢 甲基烯十二氟庚酯皰疹病-8型感染IgM抗體
彩色豆馬勃 2-(甲硫基)乙酰單純皰疹病1IgG抗體
熒光假單胞 Cys-Gly, oxidized單純皰疹病1IgM抗體
尖孢鐮刀 1-(4-氟苯基)哌EB病IgG抗體
扁柄側(cè)耳 2--4-氟巨病IgM抗體
紅曲紅曲 2--5-氟單純皰疹病2IgG抗體
褐囊蜜環(huán) 4-氨基-3-氟吡啶人類嗜T病抗體
釀酒酵母 Nefiracetam型肝炎病抗體
枯草芽孢桿 4-羥基吡啶-2-羧核糖核H
黑曲霉 2-羥基甲酯EB病抗體
釀酒酵母 2-苯氧基血吸蟲抗體
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