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| 產(chǎn)地 | 國產(chǎn) | 加工定制 | 是 |
|---|---|---|---|
| 適用領(lǐng)域 | 科研 | 貨號 | FS-01X9857 |
產(chǎn)品屬于：
產(chǎn)品名稱：骨骼肌細胞
產(chǎn)品規(guī)格：5×105
貨號：FS-01X9857
產(chǎn)品類型：原代細胞
單位：T25/瓶
提供細胞鑒定：提供免疫熒光鑒定報告
保存培養(yǎng)溫度（℃）：37
運輸溫度（℃）：常溫
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞 在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。 2.研究條件可以人為控制 pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。 3.研究的樣本可以達到比較均一性 通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。 4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄 采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備。 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項：
1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。 2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。 3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。 4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。 6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。 7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 |
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
大鼠促腎上腺皮質(zhì)(ACTH)ELISA試劑盒英文名稱：rat adrencocorticotropic hormone,ACTH ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
大鼠促卵泡(FSH)ELISA試劑盒英文名稱：rat follicle-stimulating hormone,FSH ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
大鼠雌二受體(ER)ELISA試劑盒英文名稱：rat Estradiol receptor,ER ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
大鼠前心鈉(Pro-ANP)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Pro Atrial Natriuretic Peptide,Pro-ANP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
大鼠大內(nèi)皮(Big ET)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Big Endothelin,Big ET ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
大鼠遲現(xiàn)抗原(VLA)ELISA試劑盒英文名稱：Rat very late appearing antigen,VLA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
大鼠降鈣(CT)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Calcitonin,CT ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
大鼠骨鈣/骨蛋白(OT/BGP)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Osteocalcin/Bone gla protein,OT/BGP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
大鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISA試劑盒英文名稱：Rat soluble receptor activator of nuclear factor-kB ligand,sRANKL ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
大鼠促甲狀腺(TSH)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat Thyroid Stimulating Hormone,TSH ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
大鼠皮質(zhì)(Cortisol)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Cortisol ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
大鼠雌二(E2)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Estradiol,E2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
大鼠睪(T)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Testoterone,T ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
大鼠游離睪(F-TESTO)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Free Testoterone,F-TESTO ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
大鼠雄烯二(ASD)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Androstenedione,ASD ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
大鼠雌三(E3)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Estriol,E3 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
大鼠17羥孕(17-OHP)ELISA試劑盒英文名稱：Rat 17-Hydroxyprogesterone,17-OHP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
大鼠三碘甲狀腺原(T3)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Tri-iodothyronine,T3 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T
骨骼肌細胞CLASP2 細胞連接相關(guān)蛋白2抗體規(guī)格: 0.2ml
DIS3 有絲分裂控制蛋白dis3抗體規(guī)格: 0.2ml
DPEP3 膜二3抗體規(guī)格: 0.2ml
DSN1 著絲粒相關(guān)蛋白DSN1抗體規(guī)格: 0.2ml
DUSP13 雙特異性磷13抗體規(guī)格: 0.2ml
Flotillin 1 脂閥結(jié)構(gòu)蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml
GAJ/MND1 減數(shù)分裂核分裂蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml
GLP2R 胰高血糖樣2受體抗體規(guī)格: 0.2ml
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