細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：脾源性內(nèi)皮祖細胞    

產(chǎn)品規(guī)格：5×105

貨號：FS-01X9882

產(chǎn)品類型：原代細胞

單位：T25/瓶

提供細胞鑒定：提供免疫熒光鑒定報告

保存培養(yǎng)溫度（℃）：37

運輸溫度（℃）：常溫

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

注意事項：

兔子纖溶原激活物抑制因子(PAI)ELISA試劑盒英文名稱：rabbit plasminogen activator inhibitor,PAI ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

兔子纖溶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA試劑盒英文名稱：rabbit plasminogen activator inhibitor 1,PAI-1 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

兔子細胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA試劑盒英文名稱：rabbit intercellular adhesion molecule 3,ICAM-3 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

兔子葡萄糖依賴性胰島釋放多(GIP)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit Glucose dependent insulin releasing polypeptide,GIP ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

兔子細胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISA試劑盒英文名稱：rabbit intercellular adhesion molecule 2,ICAM-2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

兔子細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒英文名稱：rabbit intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1/CD54 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

兔子透明質(zhì)(HA)ELISA試劑盒英文名稱：rabbit Hyaluronic acid,HA ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

兔子瘦(LEP)ELISA試劑盒英文名稱：rabbit Leptin,LEP ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)ELISA試劑盒英文名稱：rabbit neurotrophin 4,NT-4 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)ELISA試劑盒英文名稱：rabbit neurotrophin 3,NT-3 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

兔子神經(jīng)特異性烯化(NSE)ELISA試劑盒英文名稱：rabbit Neuron-specific enolase,NSE ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

兔子神經(jīng)生長因子(NGF)ELISA試劑盒英文名稱：rabbit Nerve growth factor,NGF ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

兔子髓磷脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit myelin basic protein,MBP ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

兔子前列腺E2(PGE2)ELISA試劑盒英文名稱：rabbit Prostaglandin E2,PG-E2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

兔子前列腺E1(PGE1)ELISA試劑盒英文名稱：rabbit Prostaglandin E1,PGE1 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

兔子皮質(zhì)/腎上腺(CORT)ELISA試劑盒英文名稱：rabbit Corticosterone,CORT ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

兔子皮質(zhì)(Cortisol)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit Cortisol ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

兔子腦鈉/腦鈉尿(BNP)ELISA試劑盒英文名稱：rabbit brain natriuretic peptide,BNP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
脾源性內(nèi)皮祖細胞CCDC16/ZNF83  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白16抗體規(guī)格: 0.2ml

CCDC21  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白21抗體規(guī)格: 0.2ml

CCDC52  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白52抗體規(guī)格: 0.2ml

CCDC6  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體(乳頭狀甲狀腺癌編碼蛋白)規(guī)格: 0.2ml

CCDC7  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體規(guī)格: 0.2ml

CCDC80  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白80抗體規(guī)格: 0.2ml

CD163L1  CD163蛋白樣1抗體規(guī)格: 0.2ml

CDAN1  先天性紅細胞生成異常性貧血蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。